[發(fā)明專利]MHC寡聚體及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680003922.1
• 申請(qǐng)日: 2006-02-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101111520A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-01-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: N·F·G·施瓦貝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 普羅伊繆因有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/705
• 分類號(hào): C07K14/705;G01N33/569
• 代理公司: 永新專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 林曉紅

本發(fā)明涉及MHC寡聚體，其中單個(gè)的功能性MHC復(fù)合物單體們 通過(guò)其結(jié)合于所述復(fù)合物的肽結(jié)合溝中的肽發(fā)生寡聚化，本發(fā)明還涉及 制備這種MHC寡聚體的方法及各種使用所述MHC寡聚體的方法。

背景技術(shù)

存在于組織的細(xì)胞表面上的主要相容性復(fù)合物(MHC)分子在通過(guò)與 T細(xì)胞表面上的T細(xì)胞受體(TCR)的相互作用將短的線性肽形式的細(xì)胞 抗原呈遞給T細(xì)胞方面起到了重要作用。MHC分子是由α和β鏈、以及 結(jié)合于當(dāng)這些鏈正確折疊時(shí)所述鏈所形成的溝的肽組成。

已經(jīng)知道分離或重組形式的MHC肽分子可以用于依據(jù)T細(xì)胞所識(shí) 別的特異性肽抗原來(lái)檢測(cè)、分離和加工處理這些T細(xì)胞。也已經(jīng)了解到 MHC分子和跨細(xì)胞表面的TCR之間的相互作用在本質(zhì)上都是多聚體的 相互作用，且單個(gè)MHC分子和給定TCR的親和力通常是相當(dāng)?shù)偷摹?

因此，盡可能開(kāi)發(fā)出多聚體形式的具有增加的功能親和力的分離或 重組的MHC肽分子，以便使得這些分子在上面所述的應(yīng)用中是更有用 的。

歐洲專利申請(qǐng)EP?812?331描述了用于依據(jù)T細(xì)胞抗原受體特異性標(biāo) 記、檢測(cè)和分離哺乳動(dòng)物T細(xì)胞的多聚體的結(jié)合復(fù)合物，所述復(fù)合物具 有結(jié)構(gòu)式(α-β-P)_n，其中(α-β-P)是MHC肽分子，n≥2，α包含I類MHC 或II類MHC分子的α鏈，β包含MHC蛋白的β鏈，以及P是基本上同質(zhì) 的肽抗原。通過(guò)將MHC分子的α或β鏈中的其中一條鏈的C末端生物素 化并將MHC單體與四價(jià)的鏈霉抗生物素/抗生物素蛋白相結(jié)合使得 MHC肽分子發(fā)生多聚化，或者通過(guò)提供其中α或β鏈中的其中一條鏈的 C末端被修飾成包含被作為多聚化實(shí)體的相應(yīng)抗體所識(shí)別的表位的 MHC分子的嵌合蛋白使得MHC肽分子發(fā)生多聚化。該文獻(xiàn)還披露了 MHC寡聚體用于依據(jù)T細(xì)胞的TCR特異性來(lái)檢測(cè)、標(biāo)記和分離特異性 T細(xì)胞的用途。

WO?93/10220披露了嵌合MHC分子，其包含MHC的可溶性部分， 這可以是與免疫球蛋白恒定區(qū)融合的I型或II類MHC。分子的MHC部 分包含互補(bǔ)的α和/或β鏈以及結(jié)合于MHC分子的相應(yīng)的結(jié)合溝的肽。因 為存在二聚體的免疫球蛋白構(gòu)架，這些嵌合MHC-Ig分子可以自我組裝 成二聚體結(jié)構(gòu)。

歐洲專利申請(qǐng)EP?665?289披露了特異肽、結(jié)合這些肽的MHC分 子、以及通過(guò)使具有結(jié)合于其內(nèi)的特異肽的相應(yīng)的MHC分子發(fā)生交聯(lián) 而獲得的寡聚體。通過(guò)使用交聯(lián)劑或者通過(guò)提供包含被免疫球蛋白例如 IgG或IgM識(shí)別的表位的MHC嵌合蛋白可以實(shí)現(xiàn)寡聚化。MHC分子可 以包含標(biāo)記，并被用于依據(jù)T細(xì)胞的特異性受體結(jié)合來(lái)標(biāo)記、檢測(cè)和分 離T細(xì)胞，并最終可以應(yīng)用于人類治療。

在另一個(gè)實(shí)施方式中，EP?665?289描述了寡聚體的MHC復(fù)合物， 其通過(guò)使用寡聚體形式的MHC結(jié)合肽發(fā)生寡聚化。通過(guò)肽上面的化學(xué) 修飾可以連接寡聚體肽，或者寡聚體肽可能已經(jīng)形成線性的寡聚體，即 一個(gè)肽鏈具有多個(gè)MHC結(jié)合部分。

US?2002/0058787披露了肽寡聚體，其包含至少兩個(gè)經(jīng)柔性分子接 頭連接的MHC結(jié)合肽。MHC結(jié)合肽可以是I類MHC結(jié)合肽或II類 MHC結(jié)合肽。也披露了用于生產(chǎn)這種寡聚體的定向克隆方法。所闡述 的寡聚體例如可以被用于特異性激活或抑制CD4+或CD8+T細(xì)胞的活 性的方法。這種方法提供了用于治療腫瘤、自身免疫性疾病、同種異體 移植物排斥和過(guò)敏反應(yīng)的治療手段。但是這些肽寡聚體并不是非常適合 于形成分離的MHC肽多聚體，因?yàn)橥ǔ１仨氃诖嬖谀栠^(guò)量的肽的條 件下孵育可溶性MHC復(fù)合物或其鏈。這會(huì)造成復(fù)合物的非常不完全的 寡聚化以及且所形成的復(fù)合物中的MHC結(jié)合肽的多個(gè)節(jié)段沒(méi)有與MHC 肽復(fù)合物結(jié)合的情況，這反過(guò)來(lái)會(huì)造成這些復(fù)合物的特異性減低以及更 高的背景結(jié)合力。

在構(gòu)建MHC多聚體時(shí)，首先需要構(gòu)建出MHC肽單體，然后通過(guò) 將它們附著到多價(jià)實(shí)體(例如如US5,635,363所述)或者彼此附著將這些 單體多聚化。但是US?5,635,363所述的方法需要MHC肽復(fù)合物的α或β 鏈具有用于單體與多價(jià)實(shí)體特異性附著的表位或位點(diǎn)。事實(shí)上，提供這 種特異性附著位點(diǎn)的便利方法還很少。