[發明專利]用于核酸提取和鑒定的方法

無效

• 申請號: 200680002953.5
• 申請日: 2006-01-20
• 公開（公告）號: CN101268198A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 沃爾弗拉姆·H.E.·普爾法;艾爾弗雷德·M·普林斯;李敦勛;琳達·安德勒斯
• 申請（專利權）人: 紐約血液中心有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C07H21/04
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 章社杲;李丙林

本申請要求于2005年1月21日提交的系列號為60/645,905的 美國臨時申請的優先權，將其說明書的全部內容以引用方式結合于 此以供參考。

背景技術

公共衛生部門越來越需要高靈敏度的病毒、細菌、真菌、寄生 蟲或細胞基因測定法。用于篩查(例如：血液供給、蚊子體內的蟲 媒病毒)、監控(例如：鳥群中的西尼羅病毒)、水分析、感染的診 斷、基于基因的診斷(例如：血友病、乳癌易感性、癌細胞)等的 高通量樣品處理，將會非常有益。

血液供給污染致病病毒如人類免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝、乙 肝或丙肝病毒、細小病毒、巨細胞病毒和EB病毒(非洲淋巴細胞 瘤病毒)以及細菌感染如萊姆病，已經成為一個越來越嚴重的問題。 美國食品與藥物管理局以及其它部門的普遍意見是：除了血清學試 驗外，所有血液均應利用聚合酶鏈式反應(PCR)分析進行篩查， 或者最終用PCR代替血清學試驗。現在認為，篩查血液的傳染性病 毒，每年將能防止至少一百個輸血相關的乙肝病毒(HBV)、丙肝 病毒(HCV)和HIV病例的發生。

直到最近，血清學試驗仍然是篩查血液所選擇的方法。這些試 驗檢測血液中抗體的存在情況，其中抗體針對病毒試劑、病毒抗原、 細菌試劑、細菌抗原等而升高。血清學篩查試驗的缺陷在于：如果 機體還沒有發動抗體反應，則不能檢測感染。

例如，血清學試驗常常無法檢測在感染的早期階段檢測被感染 個體。另外，表現為低免疫反應的個體一般攜帶少量病毒。通常， 小量病毒不能刺激抗體產生。這種病毒的一個實例是HIV。由于血 清學試驗的這些以及其它實用局限性，因此現在需要無論個體處于 哪個感染階段均可檢測感染的方法。

分離血漿中存在的核酸隨后進行PCR擴增，能夠在缺乏抗體 的情況下檢測致病體。致病體的檢測對于確保血液供給無可傳染病 原體非常關鍵。

醫療單位中篩查血液以及相關生物材料，通常是大規模進行 的。血液中心每一天通常檢測多達1000或更多單位的血液。利用 目前可用的技術每天從1000份樣品中制備分離出來的核酸，需要 相當量的時間、勞力和試劑。因此，由于技術局限性，通常不進行 大規模的個體樣品核酸檢測。

現在，如果在篩查和監測應用中采用核酸試驗，也是用于樣品 混合物中。遺憾的是，混合樣品降低了試驗的靈敏度，如果混合樣 品檢測為陽性，則延誤了最終的診斷。

提取DNA或RNA用于檢測通常涉及到采用兩種不同的提取方 法。一種方法僅適用于DNA提取；另一種方法則僅適用于RNA提 取。采用DNA提取方法得到很少量RNA，反之亦然。因此，直到 最近，血液篩查仍需要一種方法分離DNA，而需要另一種方法分 離RNA。

因此，需要一種可以高靈敏度提取及純化DNA和RNA的簡單、 有效而可信的方法，這樣一種方法對于篩查血液供給特別有用。 該方法對于多種其它應用也非常有益，例如基于基因的診斷、傳染 病的監測(例如鳥群中的西尼羅病毒、蚊群中的瘧疾)、水分析等。

發明內容

本發明提供了一種用于從樣品中提取核酸的方法，滿足了上述 需要。所述方法包括：獲得包含細胞、病毒、或者既包含細胞又包 含病毒的樣品；將含去垢劑的裂解液加入該樣品中，從而裂解細胞 或病毒并形成裂解物；向該裂解物中加入一定量足以聚集或沉淀核 酸的醇；以及通過玻璃纖維濾器過濾混合物而從裂解物-醇混合物中 純化核酸。

在另一個具體實施方式中，本發明提供了一種用于鑒定樣品中 病原體的方法。所述方法包括：獲得包含細胞、病毒、或者既包含 細胞又包含病毒的樣品；將含去垢劑的裂解液加入該樣品中，從而 裂解細胞或病毒并形成裂解物；向該裂解物中加入一定量足以聚集 或沉淀核酸的醇；通過玻璃纖維濾器過濾混合物而從裂解物-醇混合 物中純化核酸；以及分析該核酸，以鑒定病原體。

在另外一個具體實施方式中，本發明提供了一種用于鑒定水樣 中的生物污染物的方法。所述方法包括：獲得包含細胞、病毒、或 者既包含細胞又包含病毒的水樣；將含去垢劑的裂解液加入該樣品 中，從而裂解細胞或病毒并形成裂解物；向該裂解物中加入一定量 足以聚集或沉淀核酸的醇；通過玻璃纖維濾器過濾混合物而從裂解 物-醇混合物中純化核酸；以及分析該核酸，以鑒定污染物。