[發(fā)明專(zhuān)利]干式分析元件

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200680002670.0
• 申請(qǐng)日: 2006-02-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101107521A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-01-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 村谷浩二
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 富士膠片株式會(huì)社
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/52
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/52;G01N31/22;G01N21/77;G01N21/78;C12Q1/26;C12Q1/28;C12Q1/48
• 代理公司: 北京天昊聯(lián)合知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 丁業(yè)平;張?zhí)焓?/td>

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及能夠迅速/簡(jiǎn)便地測(cè)定痕量樣品溶液中的生化物質(zhì)的 干式分析元件。

背景技術(shù)

作為用于測(cè)定活體內(nèi)的生化物質(zhì)、酶和其它物質(zhì)的干式分析元件 (包括多層分析元件、干式分析元件以及多層分析裝置所有這些)， 例如，在專(zhuān)利文獻(xiàn)1和專(zhuān)利文獻(xiàn)2中描述了這些技術(shù)。這些技術(shù)涉及 用于對(duì)生物樣品(例如血液、淋巴液、腦脊髓液或尿)中所含有的成 分進(jìn)行定量分析的干式分析元件。

然而，在活體內(nèi)或活體外的極大量的生物合成反應(yīng)(不僅涉及生 物樣品中的常規(guī)生化物質(zhì)、酶等)中，都涉及焦磷酸的釋放和焦磷酸 的分解。鑒于此，當(dāng)從熱力學(xué)角度研究生物合成反應(yīng)時(shí)，對(duì)焦磷酸進(jìn) 行測(cè)定是有效的。例如，由DNA聚合酶催化脫氧核苷三磷酸聚合來(lái) 合成核酸。在該步驟中，焦磷酸作為核酸合成的副產(chǎn)物被釋放。在核 酸合成過(guò)程中，從能量角度而言，焦磷酸的釋放是很重要的。此外， 通過(guò)檢測(cè)焦磷酸來(lái)確認(rèn)核酸合成是否進(jìn)行也是重要的。例如，對(duì)于核 酸擴(kuò)增反應(yīng)后的反應(yīng)溶液，還通常實(shí)施以下的處理。通過(guò)測(cè)定焦磷酸 來(lái)確認(rèn)擴(kuò)增反應(yīng)是否實(shí)際上發(fā)生。

用于測(cè)定活體內(nèi)或活體外的此類(lèi)液體樣品中的焦磷酸的干式分 析元件技術(shù)在(例如)專(zhuān)利文獻(xiàn)3中有所描述。該技術(shù)如下所述。在 干式分析元件中，焦磷酸(PPi)在無(wú)機(jī)焦磷酸酶(PPase)的作用下 被轉(zhuǎn)化為無(wú)機(jī)磷酸(Pi)。無(wú)機(jī)磷酸(Pi)通過(guò)嘌呤核苷磷酸化酶(PNP) 與黃嘌呤核苷或次黃嘌呤核苷反應(yīng)。所產(chǎn)生的黃嘌呤或次黃嘌呤被黃 嘌呤氧化酶(XOD)氧化，從而形成尿酸。利用在該氧化過(guò)程中產(chǎn)生 的過(guò)氧化氫(H₂O₂)、通過(guò)過(guò)氧化物酶(POD)的作用使成色劑(染 料前體，例如隱色染料)顯色，并通過(guò)比色法測(cè)定該色度。

另外，作為用于測(cè)定焦磷酸的反應(yīng)體系，以下的過(guò)程也是已知的。 在生成黃嘌呤或次黃嘌呤的反應(yīng)過(guò)程中和反應(yīng)之后，例如，可以使用 心肌黃酶(DI)和在黃嘌呤脫氫酶(XDH)作用下生成的NADH使 成色劑(例如，甲型染料，如硝基四唑藍(lán))顯色，并通過(guò)比色法測(cè) 定該色度。

本文中可用的干式分析元件以這樣的方式構(gòu)建：將一層或多層功 能性層設(shè)置在透明的支持體上。使檢測(cè)試劑被包含在至少一層(或多 層)中。由此，在滴加既定量的液體樣品之后，通過(guò)分析元件外部的 反射光或透射光對(duì)層中反應(yīng)所得的染料進(jìn)行比色法測(cè)定。

在滴加既定量的液體樣品之后，將干式分析元件保持在既定的溫 度下(溫育)，以便使顯色反應(yīng)充分進(jìn)行。然后，(例如)照明光從 透明支持體一側(cè)進(jìn)行輻照。由此，測(cè)量特定波長(zhǎng)區(qū)域的反射光的量或 透射光的量，從而確定反射光密度或透射光密度。然后，根據(jù)先前測(cè) 定的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)進(jìn)行定量分析。

在(例如)專(zhuān)利文獻(xiàn)3所述的焦磷酸測(cè)定用的干式分析元件或?qū)? 利文獻(xiàn)4所述的干式分析元件中，在相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域中，所述干式分析 元件除了具有包含顯色反應(yīng)所需的試劑(如酶、顯色物質(zhì)或基質(zhì))的 層和透明支持體以外，還設(shè)置有鋪展層，從而達(dá)到容納所滴加的液體 樣品、并使該液體樣品迅速鋪展的目的。在這種情況下，作為鋪展層， 可以使用膜過(guò)濾器(刷狀聚合物)、三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物、織物等， 其中，所述的三維網(wǎng)格顆粒狀結(jié)構(gòu)物含有通過(guò)在水的作用下不會(huì)發(fā)生 溶脹的聚合物粘合劑以點(diǎn)接觸方式彼此接觸而形成的聚合物珠子。

專(zhuān)利文獻(xiàn)1：JP-A-60-82859

專(zhuān)利文獻(xiàn)2：JP-A-60-222770

專(zhuān)利文獻(xiàn)3：JP-A-2004-156983

專(zhuān)利文獻(xiàn)4：JP-A-2003-270249

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明待解決的問(wèn)題

然而，當(dāng)按照專(zhuān)利文獻(xiàn)3和4的方式設(shè)置含有所述物質(zhì)的鋪展層、 并對(duì)其進(jìn)行透射光光度測(cè)定時(shí)，入射到干式分析元件內(nèi)部的光會(huì)受到 衰減/散射等的影響。這會(huì)妨礙進(jìn)行精確的測(cè)定。另一方面，取出鋪 展層對(duì)透射光光度測(cè)定是有利的。然而，此時(shí)被滴加到功能性層中的 液體樣品的液體滲透速率降低，這不適于進(jìn)行快速的定量分析。

本發(fā)明的目的是提供這樣的干式分析元件：能夠迅速、簡(jiǎn)便地分 析(例如)液體樣品中的生物材料，并且不需要設(shè)置鋪展層。 解決所述問(wèn)題的方法