[發(fā)明專利]具有抗腫瘤作用的總蟾毒內(nèi)酯提取物、其制備方法及用途

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610167378.6
• 申請(qǐng)日: 2006-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN101209264A
• 公開（公告）日: 2008-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳宗好
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳宗好
• 主分類號(hào): A61K35/56
• 分類號(hào): A61K35/56;A61K31/58;A61K9/08;A61K9/10;A61K9/16;A61K9/19;A61K9/20;A61K9/48;A61P35/00
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 孫皓晨

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種抗腫瘤作用的活性成分提取物，尤其涉及一種從干蟾皮中提取具有抗腫瘤作用的總蟾毒內(nèi)酯(蟾毒配基類、蟾蜍毒素類)提取物以及該提取物的制備方法，本發(fā)明還涉及該總蟾毒內(nèi)酯提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。

背景技術(shù)

癌癥是危害人類生命的一大殺手，研究開發(fā)有效的抗癌藥物，是世界藥物研究者面臨的一個(gè)共同課題。在抗癌新藥的研究開發(fā)領(lǐng)域，尋找能將腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞(誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞新生血管形成、降低腫瘤轉(zhuǎn)移，是近年來抗腫瘤藥物研究開發(fā)的熱點(diǎn)，同時(shí)也是臨床上最迫切需要的抗腫瘤藥物。

總蟾毒內(nèi)酯凍干粉針的主要成分脂溶性化合物是中藥干蟾皮的主要藥效成分。總蟾毒內(nèi)酯系由傳統(tǒng)藥材蟾蜍科動(dòng)物中華大蟾蜍(Bufo?bufo?gargarizans?Cantor)或黑眶蟾蜍(Bufo?bufo?melantictusos?Schneider)陰干全皮為主要原料提取的脂溶性化合物。蟾皮，始載于《本經(jīng)逢源》，又名蝦蟆皮。全國各地均產(chǎn)，鮮用或干用。蟾蜍之名首載于《名醫(yī)別錄》，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》就載有“蝦蟆”的性味與主治。《本草蒙荃》：“味辛、氣涼、微毒”，《本草再新》：“入心、肝、脾、腎四經(jīng)”。古今驗(yàn)方廣泛應(yīng)用蟾蜍、蟾酥拔毒消腫、定痛殺蟲、強(qiáng)心利尿。在我國有長期內(nèi)服或外敷蟾蜍、蟾酥制劑治療肝癌等多種癌癥的歷史，發(fā)現(xiàn)含有脂蟾毒配基、華蟾酥毒基、蟾毒靈、蟾毒它靈、日蟾毒它靈-3-半辛二酸酯、蟾蜍靈3-丁二酰精氨酸酯、華蟾毒精3-丁二酰精氨酸酯等混合物的總蟾毒內(nèi)酯不但在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)上具有明顯的抗腫瘤作用，而且還能將腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為正常細(xì)胞(誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分化)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤細(xì)胞新生血管形成、降低腫瘤轉(zhuǎn)移等作用。

現(xiàn)有從干蟾皮中提取有效成分的方法大致分為兩種：一種是水直接提取，然后醇沉兩次，再制成成品。經(jīng)檢測(cè)，主要含有生物堿類成分及微量的蟾毒內(nèi)酯類成分，且兩類成分純度極低；另一種是采用乙醇提取，提取物上大孔吸附樹脂柱，用30～50％乙醇洗脫，回收乙醇，干燥，再制成成品。醇提取物中生物堿類成分含量30％以上；蟾毒內(nèi)酯類成分華蟾酥毒基、脂蟾毒配基含量分別為0.02％和0.014％。根據(jù)現(xiàn)有的研究文獻(xiàn)(①趙建斌等：華蟾毒精抗癌作用的體外研究.第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2001；22(16)：1504-1507。②黃應(yīng)申等：脂蟾毒配基通過線粒體途徑誘導(dǎo)人肝癌Bel-7402細(xì)胞凋亡的研究.中國腫瘤臨床，2006；33(20)：1141-1145。③徐瑞成等：蟾蜍靈誘導(dǎo)人白血病H?L?60細(xì)胞凋亡的初步研究.中國中藥雜志，2001；26(1)：59-61。④趙明芳等：蟾蜍毒素對(duì)S?180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的實(shí)驗(yàn)研究.山西醫(yī)藥雜志2006；35(3)：189-193。⑤Inada?A蟾蜍二烯羥酸內(nèi)酯抗促癌作用.國外醫(yī)學(xué)中醫(yī)中藥分冊(cè)，2000；22(4)：233-234)：干蟾皮制劑(如華蟾素注射液、華蟾素片、華蟾素口服液等)抗腫瘤有效成分應(yīng)為總蟾毒內(nèi)酯。

目前尚未有生物堿類成分為抗腫瘤活性成分的研究報(bào)道。蟾皮的水溶性成分吲哚類生物堿具有調(diào)節(jié)免疫，抑制HBV、DNA的復(fù)制，具有較強(qiáng)的抗病毒作用，改善鴨肝的病理變化。臨床用于治療人病毒性乙型肝炎。據(jù)文獻(xiàn)[龔愛平、劉金秀等：華蟾素的不良反應(yīng)(附201例臨床觀察).徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998；18(5)：418-420]報(bào)道：蟾皮的水溶性注射劑——華蟾素注射液(主要含水溶性、吲哚類生物堿，如5-羥色胺、蟾蜍色胺、蟾蜍特尼、蟾蜍硫黃等及極微量的蟾毒內(nèi)酯類成分)其臨床不良反應(yīng)率高達(dá)43.28％，作者認(rèn)為臨床上出現(xiàn)的心律失常、局部靜脈刺激反應(yīng)、皮膚反應(yīng)、哮喘、超敏反應(yīng)等不良反應(yīng)均為蟾皮的水溶性吲哚類生物堿(5-羥色胺衍生物)成分的藥理作用所致。

由此可見，上述專利方法提取的大部分為生物堿類成分，而脂蟾毒配基、華蟾酥毒基、蟾蜍靈等具有顯著抗腫瘤活性的蟾毒內(nèi)酯類成分損失殆盡，且這些方法工藝過于簡(jiǎn)單，有效成分含量低，雜質(zhì)多，制劑穩(wěn)定性差，質(zhì)控指標(biāo)低，臨床療效不穩(wěn)定，不良反應(yīng)嚴(yán)重且難以控制。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種可以從干蟾皮中的提取高純度具有抗腫瘤作用的總蟾毒內(nèi)酯提取物(有效部位)。

本發(fā)明首先所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：