[發(fā)明專利]檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610156138.6
• 申請日: 2006-12-29
• 公開（公告）號: CN101210929A
• 公開（公告）日: 2008-07-02
• 發(fā)明（設計）人: 劉海元;郎景和
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學科學院北京協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N30/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 陳軼蘭

技術領域

本發(fā)明涉及子宮內(nèi)膜異位癥診斷領域，尤其是利用SELDI技術在體外檢測子宮內(nèi)膜異位癥血漿標志蛋白質(zhì)的方法。本發(fā)明還涉及由此獲得的一系列可作為子宮內(nèi)膜異位癥的潛在生物標志物的血漿蛋白質(zhì)及其在診斷子宮內(nèi)膜異位癥中的應用。

背景技術

子宮內(nèi)膜異位癥是育齡婦女的多發(fā)病，引發(fā)多種臨床癥狀。近年發(fā)病率呈明顯上升趨勢，已達10％-15％，占婦科手術的30％以上。子宮內(nèi)膜異位癥所引起的痛經(jīng)、下腹痛和不孕嚴重影響婦女的健康和生活質(zhì)量。盡管子宮內(nèi)膜異位癥是一種良性疾病，但其病變廣泛、形態(tài)多樣，極具侵襲和復發(fā)性，對臟器結(jié)構(gòu)和功能的破壞與惡性腫瘤相當，故有“良性癌”之稱。子宮內(nèi)膜異位癥的臨床表現(xiàn)與疾病程度不成正比，因此缺乏有效的臨床診斷方法。

郎等^[14]發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜異位癥在位內(nèi)膜在粘附、侵襲和血管形成等多方面有別于正常內(nèi)膜。據(jù)此，我們提出了子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病的分子機制假說：“在位內(nèi)膜決定論”，即子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜之間存在本質(zhì)差別，子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病與否取決于患者在位內(nèi)膜的特性，經(jīng)血逆流只是實現(xiàn)這一由潛能到發(fā)病的橋梁。這一理論是我們作出本發(fā)明的理論基礎。由于子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜相比，其理化性質(zhì)和生物學行為存在明顯異常，這些異常就會反映到患者的體液中，使子宮內(nèi)膜異位癥患者的體液中的一些物質(zhì)尤其是蛋白質(zhì)的表達出現(xiàn)了質(zhì)或量上的改變，即特異性的生物標志物。它對于疾病的早期診斷、治療方案的選擇、個體化和預見性治療、臨床預后評價和疾病發(fā)病機理的研究都具有重要意義。

對于子宮內(nèi)膜異位癥，盡管目前有部分應用于臨床的標志物，如癌胚抗原125(CA125)、胎盤蛋白14(PP14)、子宮內(nèi)膜抗體和白細胞介素6(IL-6)等，它們對于臨床診斷和跟蹤復發(fā)等方面具有一定的參考價值，但仍缺乏特異性(見下表1)。

表1.已發(fā)表的子宮內(nèi)膜異位癥血清診斷標志物及其敏感性和特異性

因此，尋找敏感、特異的子宮內(nèi)膜異位癥生物標志物是目前急需解決的問題。

SELDI-TOF-MS(表面增強激光解吸電離-飛行時間-質(zhì)譜，Surface?Bnhanced?Laser?Desorption?Ionization-Time?ofFlight-Mass?Spectrometry)是最近發(fā)展起來的一種嶄新的蛋白質(zhì)組學研究方法。該技術通過經(jīng)過特殊處理的固相支持物或?qū)游霰砻妫鶕?jù)蛋白質(zhì)的物理、化學性質(zhì)不同，可以選擇性地從樣品中捕捉蛋白質(zhì)配體，與芯片結(jié)合。經(jīng)過孵育和洗脫后，進入質(zhì)譜儀進行分析。在SELDI-TOF質(zhì)譜儀中，用激光轟擊與芯片結(jié)合并與基質(zhì)混合的蛋白質(zhì)后，蛋白質(zhì)經(jīng)過軟離子化后，帶有電荷并進入電場。由于不同質(zhì)荷比的蛋白在電場中飛行時間不同，因此接收裝置可以據(jù)此將蛋白質(zhì)的質(zhì)和量用位置不同、強弱不等的圖譜表現(xiàn)出來并可以進一步分析。

SELDI技術適合臨床蛋白質(zhì)組學研究的要求，具有很高的靈敏度、特異性和重復性。另外從臨床應用的角度來看，標本處理簡單、分析方法簡便迅速。SELDI技術通過把蛋白質(zhì)結(jié)合在芯片上直接進行TOF-MS分析，避免了復雜的樣品處理過程以及由此引起的蛋白質(zhì)降解和丟失，樣品無須純化，可以直接檢測人體的血液、尿液、腦脊液、胸腔積液、關節(jié)腔滑液等體液以及支氣管灌洗液、細胞裂解液和各種分泌物。該方法還具有樣品用量小、操作簡便、高度靈敏、高通量的優(yōu)點，可以檢測到fmol(10-15mol)數(shù)量級的微量蛋白，可以同時獲得樣品中成千上萬個蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)。該技術克服了傳統(tǒng)雙向電泳中的諸多問題如：膜蛋白分離、強極性蛋白、低分子量和低豐度蛋白質(zhì)難以檢測等問題^[1-3]。尤其是對于血漿中疾病相關的分泌型蛋白時，雙向電泳就更加困難了。從傳統(tǒng)的生物標志物研究的經(jīng)驗和已有的研究結(jié)果來看，存在于血漿中的疾病相關標志性分子多為小分子量的蛋白質(zhì)或者多肽，分子量多在10000D以下，這正是傳統(tǒng)雙向電泳技術所無法覆蓋的分子量范圍。

同時SELDI技術產(chǎn)生的海量信息必須借助先進的數(shù)學模型和生物學信息技術進行分析。由于上述優(yōu)點，SELDI技術一經(jīng)推出就受到了臨床研究工作者的高度青睞和關注，國內(nèi)外學者已經(jīng)利用這一技術對多種疾病進行診斷，如卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、乳腺癌等惡性腫瘤，并開展了多項腫瘤標志物研究和發(fā)病機理研究，取得了可喜的成果(見下表2)。

表2.利用SELDI技術對多種腫瘤進行診斷的敏感性和特異性