[發明專利]一種新型煙葉發酵酶制劑生產方法

無效

• 申請號: 200610153339.0
• 申請日: 2006-09-13
• 公開（公告）號: CN101144073A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 謝勇;韓偉;陳應昆;何寶玉
• 申請（專利權）人: 謝勇;韓偉;陳應昆
• 主分類號: C12N9/98
• 分類號: C12N9/98;A24B15/20;A24B15/28
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于煙葉發酵的專用復合酶制劑，該酶制劑由葡萄糖氧化酶、葉綠素氧化酶、類胡蘿卜素氧化酶、蛋白酶及煙堿降解酶五類酶組成，其各組分的酶活比為：葡萄糖氧化酶12354，葉綠素氧化酶368，類胡蘿卜素氧化酶231，蛋白酶36310，煙堿降解酶186；其制備方法如下：選取新鮮煙葉，組織勻漿，酶群經兩次(NH₄)₂SO₄分級沉淀純化后得到粗酶液；該粗酶液用含0.1％EDTA的緩沖液進行酶金屬離子螯合，螯合條件pH8.0，1-5℃，螯合時間10-20min；然后用0.3％Ca(NO₃)₂·4H₂O和MgSO₄進行離子置換，置換條件按粗酶液：置換溶液1∶0.001體積比反應，1-5℃，置換時間8-12hr或過夜，完成酶分子修飾；經修飾的酶分子，于1-5℃條件下用0.01％蔗糖低聚物進行二次修飾保護，反應時間至少10hr以上；經過這樣處理，即可獲得所述的用于煙葉發酵的耐高溫專用復合酶制劑。

2.權利要求1所述的復合酶制劑的生產方法，其特征在于：該酶制劑由葡萄糖氧化酶、葉綠素氧化酶、類胡蘿卜素氧化酶、蛋白酶及煙堿降解酶五類酶組成，其各組分的酶活比為：葡萄糖氧化酶12354，葉綠素氧化酶368，類胡蘿卜素氧化酶231，蛋白酶36310，煙堿降解酶186；其制備方法如下：選取新鮮煙葉，組織勻漿，酶群經兩次(NH₄)₂SO₄分級沉淀純化后得到粗酶液；將該粗酶液用含0.1％EDTA的緩沖液進行酶金屬離子螯合，螯合條件pH8.0，1-5℃，螯合時間10-20min；；然后用0.3％Ca(NO₃)₂·4H₂O和MgSO₄進行離子置換，置換條件按粗酶液：置換溶液1∶0.001體積比反應，1-5℃，置換時間8-12hr或過夜，完成酶分子修飾；經修飾的酶分子，于1-5℃條件下用0.01％蔗糖低聚物進行二次修飾保護，反應時間至少10hr以上；經過這樣處理，即可獲得所述的用于煙葉發酵的耐高溫專用復合酶制劑。

3.權利要求1所述復合酶制劑的使用方法是，成品酶制劑在用蒸餾水稀釋為0.4％后，在煙葉打葉復烤前進行二潤時均勻噴施，用量200ml/50kg煙葉。

4.權利要求1所述復合酶制劑的用途，其特征是，將權利要求1所述復合酶制劑應用于煙葉發酵。