[發(fā)明專利]BMP－2蛋白膠原水溶液及制法和在植骨材料中的應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610147609.7
• 申請(qǐng)日: 2006-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN101204593A
• 公開（公告）日: 2008-06-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王會(huì)信;劉農(nóng)樂;丁紅梅;紹寧生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海海泰藥業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/38
• 分類號(hào): A61L27/38;A61L27/40
• 代理公司: 上海光華專利事務(wù)所
• 代理人: 余明偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種BMP-2蛋白膠原水溶液及制備方法及其在植骨材料中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

所說的BMP-2蛋白，是一種對(duì)骨生長和修復(fù)有明顯生物活性的細(xì)胞因子——骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone?Morphogenetic?Protein，BMP)，BMP既是多功能形態(tài)發(fā)生因子，同時(shí)又具有突出的誘骨成骨活性，具有巨大的基礎(chǔ)研究價(jià)值和廣闊的臨床應(yīng)用前景。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)二十種BMP，分別命名為BMP-1，BMP-2，...。

BMP-2可從動(dòng)物組織內(nèi)提純(p-BMP2)，也可用基因工程構(gòu)建重組細(xì)胞表達(dá)合成(rhBMP-2)。如在1979年Urist[UAnn?Thorac?Surg，1990；49(6)：864-5]領(lǐng)導(dǎo)的小組率先從兔脫鈣骨中成功地分離純化了兔的MP-2，于1982年從牛骨中提取出牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bBMP)，1987年Urist[Clin?Orthop?Relat?Res.，1987(214)：295-304]建立了一套從人及牛骨中提取BMP的標(biāo)準(zhǔn)步驟。目前，pBMP-2大多從牛、豬、羊、馬、兔、鼠等動(dòng)物的正常骨中提取。天津中津藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的金世植骨靈&reg；重組合異種骨(RBX)中的成骨誘導(dǎo)因子就是從牛骨中提取，然后再同牛骨基質(zhì)復(fù)合而成，用于治療骨折延遲連接、不連接和骨缺損治療。

利用基因工程方法生產(chǎn)人BMP-2，不僅可保證大量生產(chǎn)，還可避免免疫排斥反應(yīng)，是極具發(fā)展前景和吸引力的方法。自1988年Wozney等以牛骨為來源的BMP-2基因，并在重組大腸桿菌中成功表達(dá)后，基因工程大量生產(chǎn)人的BMP-2也就成為可能(Wozney?JM，Rosen?V，Celeste?AJ，etal，Novel?regulators?of?bone?formation：molecular?clones?and?activities，science，1988；242(4885)：1525-34)。目前，用于表達(dá)BMP-2基因的系統(tǒng)既有真核，也有原核細(xì)胞，兩種表達(dá)系統(tǒng)各有優(yōu)缺點(diǎn)。

BMP-2蛋白，可以與植骨材料組合，用于骨生長和修復(fù)。但是，無論是天然提取的BMP-2蛋白，還是原核基因表達(dá)的BMP-2蛋白，在一般緩沖液中不能溶解，只能溶解在高濃度尿素或鹽酸胍中。而尿素或鹽酸胍不可能在體內(nèi)使用，這就給該藥物的臨床使用以及與植骨材料的復(fù)合帶來極大困難。這也是目前國內(nèi)外研究BMP-2應(yīng)用技術(shù)的難題之一，極大的限制了BMP-2蛋白在臨床上的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種BMP-2蛋白膠原水溶液，以克服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。

本發(fā)明需要解決的另一個(gè)技術(shù)問題是公開所述BMP-2蛋白膠原水溶液的制備方法。

本發(fā)明再一個(gè)需要解決的技術(shù)問題是公開BMP-2蛋白膠原水溶液在植骨材料中的應(yīng)用。

本發(fā)明所說的BMP-2蛋白膠原水溶液中：

BMP-2蛋白的濃度為10mg～20mg/ml，膠原的重量濃度為0.5～5％，優(yōu)選1～3％，特別優(yōu)選1％，以及包括使所說的BMP-2蛋白膠原水溶液的pH為3-6的pH調(diào)節(jié)劑；

所說的BMP-2蛋白，選自從動(dòng)物組織中提取的天然BMP-2或原核基因表達(dá)的BMP-2蛋白；

術(shù)語“膠原”指的是從牛或豬的骨組織或筋腱中提取純化的膠原蛋白，純度應(yīng)達(dá)到電泳純度。

所說的pH調(diào)節(jié)劑選自稀釋的冰醋酸或鹽酸中的一種，重量濃度為5～30％；

本發(fā)明的BMP-2蛋白膠原水溶液的制備方法包括如下步驟：

按照上述的比例，將BMP-2干粉與膠原水溶液攪拌混合，加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH至3-6，獲得所說的BMP-2蛋白膠原水溶液；膠原水溶液的重量濃度為0.5～5％，優(yōu)選1～3％，特別優(yōu)選1％；

本發(fā)明所說的BMP-2蛋白膠原水溶液，可以與植骨材料復(fù)合，以組合物的形式，對(duì)需要進(jìn)行植骨治療。

所說的BMP-2蛋白膠原水溶液與植骨材料復(fù)合形成的組合物中，BMP-2蛋白膠原水溶液與植骨材料的比例根據(jù)不同的植骨材料而定；

動(dòng)物試驗(yàn)證明，所說的BMP-2蛋白膠原水溶液無毒性，與所說的植骨材料復(fù)合后，可以采用常規(guī)的方法對(duì)患者進(jìn)行治療。

本發(fā)明很好的解決了BMP-2的溶解問題，從而解決了與各種材料難以復(fù)合難題。膠原是抗原性極低的蛋白，而且具有結(jié)合BMP-2，促進(jìn)BMP-2活性的作用，因此在體內(nèi)與BMP-2復(fù)合使用不僅不會(huì)帶來藥物的副作用，而且有利于BMP-2活性的發(fā)揮。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1