[發明專利]一種香草酸甲酯的制備方法

無效

• 申請號: 200610147277.2
• 申請日: 2006-12-14
• 公開（公告）號: CN101200736A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發明（設計）人: 許向前;陳代杰;羅敏玉;楊志鈞
• 申請（專利權）人: 宋征宇
• 主分類號: C12P7/62
• 分類號: C12P7/62;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及一種用麥角菌(Claviceps?sp.)CGMCC?No.3997制備香草酸甲酯的方法。

背景技術

香草酸酯類，如香草酸甲酯及香草酸乙酯，是一類用途十分廣泛的香料，不僅可作為香水，護膚護發，化妝品，理發用品，空氣清新劑，止汗露以及房屋除臭劑等化工產品的添加劑，還可用作許多食品調味劑，用于食品、煙草、調味品和日化香精中，是很好的定香劑。

香草酸甲酯還是合成很多藥物的原料，合成許多化工產品的原料和前體物質。

目前，絕大多數的香草酸甲酯來源于化學合成，少量取自植物，香草酸甲酯也是許多葡萄酒的主要揮發性香味成分，其來源是釀酒酵母或其它細菌將葡萄中含有的香草酸甲酯葡萄糖苷類物質水解，并釋放出來。

香草醛是香草酸甲酯化學合成的重要前體。市場上供應的香草醛有兩種：(1)化學合成的香草醛，世界年銷量超過10,000噸，主要以愈創木酚和木質素為原料合成，其市場價格較低。(2)天然香草醛，是指由動植物材料經物理(包括蒸餾、萃取)方法、酶法或微生物方法得到的。從植物中提取的天然香草醛主要來自天然香子蘭花莢的醇提物，這種來源的天然香草醛價格遠遠高于合成產品的價格(曾有報道稱達300倍之多)。天然香草醛的價格昂貴，一方面是由于香子蘭花莢的來源非常有限，受產地、天然因素的影響，培育、收獲和處理勞動強度大，成本高昂，特別是香子蘭種植過程中需要對花朵進行人工授粉，難以大規模種植。另一原因是人們對天然香味物質的青睞有加。

天然香草醛的市場需求日益增長，作為一種安全、可靠的香料和原料藥中間體，其越來越受到重視。

目前使用的香草酸甲酯與香草醛的情況十分相似，大多數來源于化學合成；而來自于植物根莖的天然香草酸甲酯由于來源困難、提取耗費成本高、消耗大，因而代價十分昂貴。若能通過微生物發酵來工業化制備，由于在原材料來源、成本、產能、生態、環保效益等諸多方面顯示出極大優勢，必將成為一大突破亮點。來自于微生物制備的香草酸甲酯有望替代昂貴的植物來源產物或化學合成產物而成為安全的天然綠色產品。

發明內容

本發明所要解決的技術問題就是用微生物培養的方法，即香草酸甲酯可從麥角菌(Claviceps?sp.)CGMCC?No.3997經培養、發酵、純化提取而得。本發明將菌種在培養基上分別進行斜面培養、種子培養以及發酵培養，再分離純化得到產物香草酸甲酯。本發明的方法開創了用麥角菌或同類菌種甚至用生物方法制備香草酸甲酯的先河。一種的制備方法，其特征在于是

培養基：

1.斜面培養基(PDA)(％)：馬鈴薯提取物20，葡萄糖2，瓊脂2，pH6.0。

2.種子培養基(％)：葡萄糖10，檸檬酸1，酵母膏0.01，KH₂PO₄?0.05，MgSO₄·7H₂O?0.03，KCl?0.03，FeSO₄·7H₂O?0.0007，ZnSO₄·7H₂O?0.0006，氨水調pH至5.0。

3.采用的發酵培養基含有：蔗糖1％-30％，檸檬酸0.1％-3.0％，酵母粉0-0.5％或蛋白胨0-0.1％，無機鹽包括KH₂PO₄，MgSO₄，KCl，FeSO₄，ZnSO₄等少量。

經試驗比較較優的發酵培養基含有：蔗糖1％-10％，檸檬酸0.1％-0.5％，酵母粉0.01％-0.1％或蛋白胨0.01％-0.1％，KH₂PO₄0.05％，MgSO₄·7H₂O?0.05％，KCl?0.012％，FeSO₄·7H2O?0.0007％，ZnSO₄·7H₂O?0.0006％。

培養條件：

采用二級發酵，冷凍管保藏的菌種接種到斜面培養基，于25℃培養，斜面孢子成熟后，制備孢子懸液，以孢子懸液接種種子培養基，在搖床上25℃培養4-5天后，轉接到發酵培養基。發酵培養條件為：pH5-7，溫度22-28℃，發酵周期5-12天。較優發酵培養條件為：pH5.0-6.0，溫度23-26℃，發酵周期8-10天。

產物的分離純化：