[發明專利]抗體組及質譜檢測變異或修飾生物標志群的試劑盒和方法

有效

• 申請號: 200610140652.0
• 申請日: 2006-10-08
• 公開（公告）號: CN101158666A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發明（設計）人: 許洋
• 申請（專利權）人: 許洋
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N33/53;G01N33/577
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1.一種用含有抗體組的基質去捕獲生物樣品中生物標志的分析方法，其特征是采用質譜法對樣品中已被抗體組捕獲的生物標志進行精確地鑒別、檢測的方法。該方法通過以下步驟實現：

(1)樣品處理及質譜標準化質控血清制備；

(2)基質與多種抗體結合試劑盒制備、樣品上樣；

(3)洗滌；

(4)質譜的定量控制及質譜測試；

其中所述步驟(1)將生物樣品稀釋在稀釋緩沖溶液中。用O型血，男女相等，混合制備質譜的標準化質控血清；所述步驟(2)將質譜的標準化質控血清及樣品點樣在有支持物的基質中的一個位點上。支持物可用金屬片、玻璃片、陶瓷片、陶瓷珠、磁性珠、多聚體、液相色譜柱子或Sepharose?beads等?；|是任何能與抗體選擇性或特異性結合的物質；所述步驟(3)用結合緩沖液洗滌。在樣品完全干燥前將第一份洗滌溶液加到該位點。洗滌溶液在位點上至少停留10秒。徹底清除第一份洗滌溶液，用第二份洗滌液重復以上步驟。用水徹底洗滌整個陣列點，自然干燥基質及滯留的生物標志；或用三氟乙酸徹底洗滌整個陣列點(當用陶瓷珠、磁性珠、多聚體、液相色譜柱子或Sepharose?beads為支持物時)，將生物標志洗脫至質譜專用金屬片或位點上。所述步驟(4)加0.5μL吸能分子(以50％乙腈，0.5％三氟乙酸的制備的飽和標準溶液)用質譜儀去分析滯留與各位點的生物標志或用電噴霧電離已洗脫的生物標志后用質譜儀去分析。用計算機分析數據。定量性質譜調控：每次測試前，用質譜的標準化質控血清，將標準化質控血清中用于定量的標準峰4091.1Da或6634.0Da強度調至50％信號強度的最大值。

2.權利要求1所述的基質是用于捕獲多種抗體的，抗體是用于捕獲已知的生物標志。所述的生物標志的分析方法，可以檢測多個的、變異的或修飾的生物標志群。

3.權利要求1所述的生物標志的分析方法，所捕獲的生物標志群來源于已經脫離人體或動物體的生物樣品-血液，體液，分泌物，細胞溶解液，組織溶解物和器官溶解物。

4.用權利要求1的方法分析生物樣品中特異的生物標志以檢測正常與疾病生物標志的方法。

5.用權利要求2的方法，可以同時檢測出三種以上疾病的生物標志及一種或多種氨基酸變異或甲基化等修飾的生物標志的方法。

6.權利要求1中基質是任何能與抗體結合的物質：用蛋白A和G標記的基質，用carboxylate-groups標記的磁性珠上基質，用streptavidin標記的基質，或用MEPHyperCel標記的陶瓷珠上基質等。

7.權利要求1中基質的支持物可以是金屬片、玻璃片、陶瓷片、陶瓷珠、磁性珠、多聚體、液相色譜柱子或Sepharose?beads。

8.一種權利要求1所述的生物標志的用途，其特征在于，用于制備檢測變異或修飾生物標志的試劑盒。

9.一種權利要求8所述的檢測變異或修飾生物標志的試劑盒，其特征在于，它包括：一容器以及裝于容器中的權利要求8所述的檢測變異或修飾生物標志的抗體及抗體組。

10.如權利要求9所述的試劑盒，其特征于，所述的抗體(組)為單克隆抗體(組)或多克隆抗體(組)。