[發明專利]一種簡易的雞胚接種封口方法

無效

• 申請號: 200610134412.X
• 申請日: 2006-11-29
• 公開（公告）號: CN101191046A
• 公開（公告）日: 2008-06-04
• 發明（設計）人: 李天憲;唐霜;陳繩亮;張忠;李永東;寇錚;范兆軍
• 申請（專利權）人: 中國科學院武漢病毒研究所
• 主分類號: C09K3/00
• 分類號: C09K3/00;C12N7/00
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司
• 代理人: 張晨

技術領域：

本發明涉及病毒的雞胚接種培養方法，特別提供了用于雞胚接種封口的組合物。

背景技術：

雞胚接種培養是病毒學的重要方法之一，來自禽類的病毒，均可在雞胚中繁殖，哺乳動物的病毒如藍舌病病毒、流感病毒等也可在雞胚中增殖，雞胚接種技術是被認為在流感尤其是禽流感病毒分離培養方法中最為經典適用的方法。針對目前禽流感病毒肆虐的嚴峻局勢，有效快速的分離到病原，并降低實驗過程中可能的風險，無疑會為禽流感病毒的防治、研究工作提供便利。

常規的雞胚接種技術操作是：將9-10日齡雞胚先用檢卵燈檢查雞胚活力，并用鉛筆畫出氣室和胚胎的位置及進針部位，在無菌條件下，先用打孔器打孔，然后采用尿囊腔接種、卵黃囊接種等方法將病料或病毒株接種于雞胚，用液體石蠟封口后，置37℃培養箱繼續孵化，棄24小時后死亡雞胚，繼續置37℃培養箱繼續孵化至96小時，放置4℃冰箱過夜，最后無菌操作吸取尿囊液，檢測HA效價，即為增殖培養的病毒樣品。

對于“封口”這一步操作，傳統雞胚接種方法是用石蠟封口，操作過程是：必須事先將固體石蠟用酒精燈加熱融化至液態，然后吸取一滴，滴在進針的孔上，待其凝固成固態后封住小孔，再如此進行下一個雞胚的封口。此操作過程中需要一直用酒精燈對石蠟加熱保溫，耗時較長，而融化較劣質的石蠟時，容易產生刺鼻難聞的煙霧，造成實驗室環境的污染；同時明火的存在，更是給實驗室帶來火災的安全造成隱患。

發明內容：

本發明的目的在于提供一種雞胚接種封口方法，通過一種新型的封口用材料替代石蠟封口，使得雞胚接種的操作更為簡單。

本發明具體提供了一種簡易的雞胚接種封口方法，其特征在于采用如下重量百分比成分的組合物作為封口劑：

乙酸乙酯??10～30

乙酸丁酯??20～40

硝基纖維素10～20

氨基樹脂??15～35

樟腦??????1～5

本發明簡易的雞胚接種封口方法中，封口劑中優選的組分為：

硝基纖維素12～16

氨基樹脂??25～32

樟腦??????2～4

本發明中的乙酸乙酯和乙酸丁酯作為一種混合的活性溶劑，用來溶解硝基纖維素等物質，這種按一定比例配制的組合液，具有合適的揮發性，一方面改善了組合物的干燥速度，另一方面使得成膜均勻。組分中的硝基纖維素作為一種成膜劑，可形成一層初級膜，它的粘度保證了組合物具有適當的流動性。本發明中還含有氨基樹脂和樟腦，氨基樹脂和樟腦的加入可降低纖維素膜的硬度，增強附著力和柔韌性。

在雞胚接種封口操作時，采用本發明封口劑直接涂抹進針孔，涂抹后迅速薄膜封閉接種的部位。此方法簡單易行，大大節省了操作時間和實驗原料；同時也較好的避免了由酒精燈融化石蠟封口所帶來的實驗室空氣污染和火災安全隱患問題。用石蠟和本發明封口劑的利弊具體可見下表：

表1：石蠟和普通封口劑封口的利弊比較