[發(fā)明專利]突變青霉素G酰化酶、其重組表達(dá)質(zhì)粒及轉(zhuǎn)化的工程菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610118042.0
• 申請(qǐng)日: 2006-11-08
• 公開（公告）號(hào): CN101177688A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃鶴;張磐;王金剛;袁中一;楊晟;姜衛(wèi)紅
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N15/55
• 分類號(hào): C12N15/55;C12N9/86;C12N1/21
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

1.一種青霉素G酰化酶的突變DNA序列，其特征在于，其表達(dá)蛋白的氨基酸序列與巨大芽孢桿菌青霉素G酰化酶的氨基酸序列相比，在位點(diǎn)α144上的酪氨酸被精氨酸替代，或位點(diǎn)α145上的苯丙氨酸被丙氨酸、亮氨酸或酪氨酸替代，或位點(diǎn)β24上的纈氨酸被苯丙氨酸替代或以上這些突變位點(diǎn)的組合，以及這些突變位點(diǎn)與其它無義突變或同義突變的組合。

2.如權(quán)利要求1所述的突變DNA序列，其特征在于，其表達(dá)蛋白的氨基酸序列與巨大芽孢桿菌青霉素G酰化酶的氨基酸序列相比，在位點(diǎn)α144上的酪氨酸被精氨酸替代，同時(shí)在位點(diǎn)β24上的纈氨酸被苯丙氨酸替代。

3.如權(quán)利要求1或2所述的DNA序列，其特征在于，該序列是通過對(duì)巨大芽孢桿菌來源的PGA的DNA序列進(jìn)行定點(diǎn)突變而獲得的。

4.一種突變質(zhì)粒，其特征在于，該突變質(zhì)粒含有如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的基因序列。

5.如權(quán)利要求4所述的突變質(zhì)粒，其特征在于，該突變質(zhì)粒還含有氨芐霉素抗性基因。

6.一種具有青霉素G酰化酶合成性能的工程菌，其特征在于，該工程菌轉(zhuǎn)化有權(quán)利要求4或5所述的突變質(zhì)粒。

7.如權(quán)利要求6所述的工程菌，其特征在于，該工程菌為枯草桿菌。

8.如權(quán)利要求7所述的工程菌，其特征在于，該工程菌為枯草桿菌WB600。

9.一種權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的突變DNA序列所表達(dá)的青霉素G酰化酶突變酶。

10.如權(quán)利要求9所述的突變酶，其特征在于，該酶由權(quán)利要求6-8任一項(xiàng)所述的工程菌經(jīng)發(fā)酵而獲得。