[發(fā)明專利]一種高含量蟲草素的北冬蟲夏草工業(yè)化培養(yǎng)方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610117998.9
• 申請日: 2006-11-06
• 公開（公告）號(hào): CN101177665A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張剛;范培萍
• 申請（專利權(quán)）人: 張剛;范培萍
• 主分類號(hào): C12N1/14
• 分類號(hào): C12N1/14
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司
• 代理人: 王巍

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明屬于食品技術(shù)領(lǐng)域。具體涉及一種高含量蟲草素的北冬蟲夏草工業(yè)化培養(yǎng)方法。

背景技術(shù)：

冬蟲夏草為中外馳名的珍貴中草藥，其主要成分為：蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖以及抗衰老、抗惡性腫瘤的活性物質(zhì)等，具有滋肺補(bǔ)腎、益精定喘、擴(kuò)展血管、降低血壓、抗病毒等多種功效。于是冬蟲夏草需求量不斷增加，有限的天然資源，日趨枯竭，且人工栽培不易成功。

北蟲草，又稱北冬蟲夏草。北蟲草的藥用成分及含量和藥用價(jià)值可與冬蟲夏草媲美，其中蟲草素含量為冬蟲夏草的3-5倍，其它主要成分的含量多數(shù)高于或相當(dāng)于冬蟲夏草。北蟲草可以人工栽培，培養(yǎng)基的原料主要為大米。本發(fā)明通過對北蟲草菌株的篩選，得到蛹蟲草COB201，其蟲草素含量平均為1.4％，最高可達(dá)1.7％。目前，其他北冬蟲夏草菌株蟲草素含量為0.5-0.7％，天然蟲草中蟲草素含量約為0.2％。關(guān)于高含量蟲草素的北冬蟲夏草，因各種原因尚無工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于研究設(shè)計(jì)高含量蟲草素的北冬蟲夏草工業(yè)化培養(yǎng)方法。

本發(fā)明人經(jīng)過長期研究，篩選到能用于工業(yè)化生產(chǎn)制備高含量蟲草素的北冬蟲夏草的菌株。

本發(fā)明所涉及的北冬蟲夏草菌株是從沈陽棋盤山上的野生北冬蟲夏草中分離馴化出來的。從棋盤山上采集來的野生北冬蟲夏草先用75％的酒精清洗，再用1％HgCl2溶液浸泡2min，然后用無菌水洗4次。清洗干凈的野生北冬蟲夏草進(jìn)行北蟲草孢子分離，進(jìn)而分離得到純的菌株，經(jīng)三個(gè)世代的培養(yǎng)馴化，篩選出蟲草素含量較高的COB201株菌。該菌株為：蟲草屬菌種，蛹蟲草(蛹蟲草擬青霉)Cordyceps?militaris。由上海高博特生物保健品有限公司篩選得到。菌種培養(yǎng)條件：PDA馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，避光溫度20℃±1℃。

北冬蟲夏草菌株COB201經(jīng)北京微生物研究所進(jìn)行菌種鑒定和毒力試驗(yàn)，鑒定為蛹蟲草擬青霉，該菌株作為一個(gè)新的北冬蟲夏草株已于2006年9月22日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏。(地址：北京市海淀區(qū)中關(guān)村一條13號(hào)，中國科學(xué)院微生物研究所)。保藏號(hào)CGMCC?No.1823，蟲草屬菌種，蛹蟲草(蛹蟲草擬青霉)Cordyceps?militaris。

本發(fā)明提供了一種高含量蟲草素的北冬蟲夏草工業(yè)化培養(yǎng)方法

本發(fā)明方法包括下列步驟：

(1)菌種制備：從野生蟲草中分離得到的北冬蟲夏草母種，蛹蟲草擬青霉，CGMCC?No.1823接入改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中，20℃±1℃，避光培養(yǎng)10-12天，再接入原種培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，20℃±1℃，搖床培養(yǎng)5天，培養(yǎng)好的北冬蟲夏草菌液放入冰箱，備用；

改良馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基配方，每1000ml：

土豆190-210g??蔗糖19-21g??瓊脂19-21g

加水補(bǔ)足1000ml

原種培養(yǎng)基配方，每1000ml：

土豆190-210g??蔗糖9-11g??蛋白胨0.9-1.1g??胡蘿卜9-11g??洋蔥9-11g蘑菇9-11g??雞蛋4-6g??明礬0.04-0.06g??碳酸氫鈉0.9-1.1g加水補(bǔ)足1000ml

(2)配料裝瓶

培養(yǎng)瓶體積為255ml，每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入大米24g，水32ml，混勻后上蓋，準(zhǔn)備滅菌；

(3)滅菌

將培養(yǎng)瓶排列整齊放入滅菌鍋內(nèi)，在121℃下，高壓蒸汽滅菌30分鐘。冷卻后，取出準(zhǔn)備接種；

(4)接種

將步驟(1)里培養(yǎng)好的原種液，按每個(gè)培養(yǎng)瓶中加入2.5ml的原種液進(jìn)行接種；

(5)培養(yǎng)

接好種的北蟲草培養(yǎng)瓶，移至培養(yǎng)架中，控制培養(yǎng)溫度20℃±1℃，濕度控制在65％-95％，每天光照9小時(shí)，光照強(qiáng)度為1500lx-35001x，每天通風(fēng)1小時(shí)以上。培養(yǎng)45-60天，待北冬蟲夏草成熟后(直徑2mm，長8cm)，即可進(jìn)行檢驗(yàn)和包裝成品。

本發(fā)明產(chǎn)品的檢測結(jié)果

北冬蟲夏草中腺苷和蟲草素的檢測方法

1.原理

蟲草素和腺苷的酸堿性不同以及結(jié)構(gòu)差異，導(dǎo)致他們與柱內(nèi)載體吸附能力的不同，同時(shí)利用緩沖溶液加大蟲草素和腺苷的洗脫時(shí)間差，從而達(dá)到分離的目的。腺苷在256nm處有最大吸收，蟲草素在此波長接近最大吸收，且吸收值與濃度呈線形關(guān)系。

2.試劑

2.1磷酸二氫鉀(分析純)、乙醇(優(yōu)級純)、甲醇(優(yōu)級純)、腺苷標(biāo)準(zhǔn)品、蟲草素標(biāo)準(zhǔn)品、雙蒸水