[發明專利]PTD－酪氨酸羥化酶催化區域融合蛋白及其應用

有效

• 申請號: 200610114911.2
• 申請日: 2006-08-10
• 公開（公告）號: CN101121751A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發明（設計）人: 吳少平;孫曼霽
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院毒物藥物研究所
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K38/16;A61K38/43;A61K9/00;A61P25/16;C12N15/62
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 程泳

技術領域

本發明涉及基因工程和藥學領域。具體地涉及蛋白轉導域-酪氨酸羥化酶催化區域融合蛋白和應用。?

背景技術

由于血腦屏障的選擇性通透作用，使許多治療腦部疾病的藥物不能直接到達腦部病變部位，限制了其對疾病的治療。?

帕金森病(Parkinson’s?disease，PD)是一種老年人常見的慢性進展性運動障礙性疾病，其臨床表現以靜止性震顫、肌強直、運動遲緩和姿勢反射障礙為特征。PD的病理改變主要為黑質致密部多巴胺(Dopamine，DA)能神經元嚴重缺乏，其生化改變主要為黑質、紋狀體DA遞質減少。目前最有效的治療措施是口服補充DA的前體物質左旋多巴，但一般服藥3-5年后療效顯著下降并出現毒副作用。酪氨酸羥化酶是兒茶酚胺類活性物質生物合成的限速酶，其催化活性殘基都位于其C-端的330個氨基酸中，在N-端的氨基酸中沒有與催化活性有關的氨基酸。研究表明，蛋白轉導域(protein?transduction?domain，PTD)能夠有效地通過生物膜，將外源蛋白質與PTD連接后，能夠進入細胞和通過血腦屏障。將PTD的轉導特性應用于藥物治療疾病方面，具有重要的臨床價值。?

本發明的目的，在于制備PTD-酪氨酸羥化酶催化區域融合蛋白，以期在臨床治療中，提高藥物到達病變部位的量，更好地發揮治療作用。?

發明內容

在一方面，本發明提供一種蛋白轉導域-人酪氨酸羥化酶催化區?域的融合蛋白，其中的蛋白轉導域能引導人酪氨酸羥化酶催化區域通過血腦屏障，從而使酪氨酸羥化酶催化區域在不需進行外科手術情況下到達腦部發揮活性。?

滿足這一要求的蛋白轉導域可以是HIV-1反式激活蛋白(trans-activator?transcription，TAT)中的蛋白轉導區(proteintransduction?domain，PTD)、果蠅觸角蛋白同源結構域(ANTP)和單純皰疹病毒(HSV)VP22蛋白的蛋白轉導序列。特別是具有序列：YGRKKRRQRRR(SEQ?ID?NO：1)或其功能性片段的PTD。?

本發明融合蛋白中的人酪氨酸羥化酶催化區域優選具有下述序列(THc)：LLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLSWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG(SEQ?ID?NO：2)或其功能性片段。?

更優選的，本發明的融合蛋白具有下述序列：YGRKKRRQRRREFLLSGVRQVSEDVRSPAGPKVPWFPRKVSELDKCHHLVTKFDPDLDLDHPGFSDQVYRQRRKLIAEIAFQYRHGDPIPRVEYTAEEIATWKEVYTTLKGLYATHACGEHLEAFALLERFSGYREDNIPQLEDVSRFLKERTGFQLRPVAGLLSARDFLASLAFRVFQCTQYIRHASSPMHSPEPDCCHELLGHVPMLADRTFAQFSQDIGLASLGASDEEIEKLSTLSWFTVEFGLCKQNGEVKAYGAGLLSSYGELLHCLSEEPEIRAFDPEAAAVQPYQDQTYQSVYFVSESFSDAKDKLRSYASRIQRPFSVKFDPYTLAIDVLDSPQAVRRSLEGVQDELDTLAHALSAIG(SEQ?ID?NO：3)，其中：?

1)殘基1-11為HIV-1的反式激活蛋白的47-57位肽；?

2)殘基12-14為連接序列；?

3)殘基15-367為THc序列。?