[發(fā)明專利]一種豬瘟復(fù)制子載體疫苗、其制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610111304.0
• 申請日: 2006-08-18
• 公開（公告）號: CN101116749A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 仇華吉;李娜;趙建軍;羅玉子;涂長春;童光志
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/187;A61P31/12;C12N15/86;C12N15/12;C12N15/40
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 孫皓晨

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疫苗，尤其涉及一種豬瘟復(fù)制子載體疫苗、其制備方法及應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

豬瘟(classical?swine?fever，CSF)是豬的一種烈性傳染病，被國際動物衛(wèi)生組織列為A類傳染病，主要流行亞洲、歐洲和南美洲，對世界養(yǎng)豬業(yè)威脅極大。豬瘟的病原為豬瘟病毒(classical?swine?fever?virus，CSFV)，CSFV的分類地位如下：

病毒界(Vira)

黃病毒科(Flaviviridae)

瘟病毒屬(Pestivirus)

豬瘟病毒(classical?swine?fever?virus)

瘟病毒屬還有牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)和綿羊邊界病病毒(BDV)等成員。CSFV為單股正鏈RNA病毒，其基因組約為12.5kb，含有唯一的開放閱讀框架，編碼一個大的多聚蛋白，經(jīng)蛋白酶水解加工后，產(chǎn)生4種結(jié)構(gòu)蛋白(C、E^rns、E1和E2)和7種非結(jié)構(gòu)蛋白(N^pro、p7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)[J?Virol.1999，73(9)：7787-94]。豬只感染CSFV后，可產(chǎn)生針對E2、E^rns和N^pro蛋白的抗體。E2蛋白是一種囊膜糖蛋白，可誘導(dǎo)豬產(chǎn)生中和抗體，能對豬瘟強(qiáng)毒攻擊提供完全的免疫保護(hù)[J?Virol.1993，67(9)：5435-42]；E^rns是可分泌蛋白，也能誘生中和抗體，可對強(qiáng)毒攻擊提供部分保護(hù)[J?Virol.1995，69(10)：6479-86]。

通常采用疫苗接種來預(yù)防豬瘟，著名的中國豬瘟兔化弱毒疫苗(C株)、日本GPE-株和法國的Thiverval株等減毒活疫苗至今仍在一些國家和地區(qū)應(yīng)用。然而用這些常規(guī)疫苗接種豬后，無法通過血清學(xué)方法將疫苗接種豬與野毒感染豬相區(qū)分，因此，近年來，國內(nèi)外有許多學(xué)者致力于研制“標(biāo)記疫苗”(marker?vaccines，或DIVAvaccine)[J?Biotechnol.1999，73(2-3)：195-205]。迄今問世的各種豬瘟基因工程標(biāo)記疫苗基本上是以E2蛋白為基礎(chǔ)：如用重組桿狀病毒生產(chǎn)的豬瘟病毒E2亞單位疫苗[JVirol.1993，67(9)：5435-42；Vet?Microbiol.1999，66(2)：101-14]；表達(dá)豬瘟病毒E2的重組偽狂犬病病毒[J?Virol.1991，65(5)：2761-5；J?Gen?Virol.1997，78(12)：3311-5]、重組腺病毒[Vaccine.2000，18(11-12)：1040-50]或重組豬痘病毒[J?Virol?Methods.2001，93(1-2)：49-56]等病毒活載體疫苗；基于E2基因的DNA疫苗[Vaccine.2000，18(18)：1932-8；Vaccine.2001，19(17-19)：2480-4]；缺失E^rns基因的豬瘟cDNA克隆衍生病毒[J?Virol.2000，74(7)：2973-80；Vaccine.2002，20(11-12)：1544-56]和用BVDV?E^rns基因置換CSFV相應(yīng)區(qū)域的嵌合豬瘟病毒[Vaccine.2000，9(4-5)：447-59；Vaccine.2001，9(11-12)：1467-76]等反向遺傳操作疫苗。這些疫苗的共同特征是，以E2蛋白作為保護(hù)性抗原，不含有或不表達(dá)E^rns蛋白，因此可用基于E^rns抗原的E^rns-ELISA診斷方法對疫苗接種豬和野毒感染豬進(jìn)行鑒別診斷[Vet?Microbiol.2000，73(2-3)：209-19]。不過，由于安全性(如反向遺傳操作疫苗或載體疫苗)或免疫效力(如亞單位疫苗和DNA疫苗)等方面的原因這些新型疫苗并未獲得廣泛臨床應(yīng)用。

基于傳統(tǒng)載體的DNA疫苗存在很多缺點：外源基因表達(dá)水平低，誘導(dǎo)抗體產(chǎn)生慢，接種劑量大，特別令人擔(dān)心的是，常規(guī)DNA疫苗有整合和轉(zhuǎn)化染色體的潛在危險[Ann?N?YAcad?Sci.1995，772：30-9]。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種新的豬瘟復(fù)制子載體疫苗。

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下技術(shù)途徑來實現(xiàn)的：