[發明專利]作為豬生殖和呼吸道征候群疫苗的PRRS病毒的融合蛋白

有效

• 申請號: 200610098812.X
• 申請日: 2006-07-11
• 公開（公告）號: CN101104641A
• 公開（公告）日: 2008-01-16
• 發明（設計）人: 章修綱;廖朝
• 申請（專利權）人: 生寶生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/47;A61K39/12
• 代理公司: 中科專利商標代理有限責任公司
• 代理人: 周長興

技術領域

本發明是關于具備誘發豬只產生PRRSV中和力價反應的融合蛋白次單位疫苗。

背景技術

豬生殖與呼吸道征候群(porcine?reproductive?and?respiratory?syndrome，PRRS)是一種由豬生殖與呼吸道征候群病毒(PRRSV)感染，其為一種會導致母豬繁殖障礙，并對各年齡層豬只呼吸道感染為主的豬只傳染病。PRRSV被視為極頑強的病毒，其基于在寄主體內不易誘發具有中和力價的抗體。且PRRSV為RNA病毒，可在寄主細胞內經由簡化的基因復制系統進行繁殖，也因此基因突變機率非常高。此外，PRRSV感染可分為兩階段：(A)感染上呼吸道及下呼吸道上皮細胞系統；及(B)感染呼吸道外圍組織的單核球及巨嗜細胞。因此，寄主需同時具備中和力價的體液或黏膜免疫反應機制及細胞免疫機制，利于清除被感染的細胞以進行防御。然而，自然界中PRRSV可以真正的在動物體內產生中和力價即不容易，因此一般的抗體對防御PRRSV效果不大，甚至會刺激病毒的突變。因此，在抗體-依賴性的增強作用機制中，非中和力價抗體的使用可能導致更嚴重的感染。

中國臺灣第I-2289933號(美國專利公開號US?20040247617)中，提供一種對標靶細胞具專一性的融合蛋白，該融合蛋白利用一綠膿桿菌外毒素部位及一功能區架構PRRSV?ORF7核蛋白片段，并于羧基端添加KDEL訊碼。該融合蛋白可以大量在大腸桿菌中生產，免疫豬只后，可有效降低及清除豬只攻毒后的病毒血癥的發生。該專利的全文引用記載并入本申請中。

在PRRSV的ORF5與ORF6雜二聚合反應(heterodimerization)中，ORF5的Cys-34抗原決定部位區域，及ORF6的Cys-8抗原決定部位區域，對病毒感染及其外套膜裝配(envelope?assembly)具關鍵性作用(Snijder?Eric?J.，Jessica?C.et?al.，Journal?ofVirology，January?2003，Vol.77，No.1：97-104)。此外，PRRSV?ORF5的保留序列(consensus?sequence)-YKNTHLDLIYNA，為介于胺基酸38至44之間的抗原決定部位，其位于PRRSV?ORF5的N-端體外區，業經鑒別為一中和抗原決定部位(Ostrowski?M.，J.A.Galeota，et?al.，Journal?of?Virology，May?2002，Vol.76，No.9：424?1-4250)。

公知技術亦曾將ORF5或ORF6整個蛋白架構在PE及KDEL中間，免疫到豬只后發現，攻毒的豬只在肺部反而發生更嚴重的發炎現象，顯見ORF5或ORF6比本身更具有免疫毒性。因此，欲有效防治豬只感染PRRS，仍有必要發展具有高中和力價且低免疫毒性的疫苗。

發明內容

本發明目的之一是提供一種融合蛋白，及其組合方式。

本發明的另一目的是關于利用該等融合蛋白制備具中和力價融合蛋白組成的次單位PRRS疫苗。

本發明的再一目的是提供醫藥組合物，其包括本發明的融合蛋白及在藥學上可接受的載劑。

為實現上述目的，本發明提供的PE-PQGAB-K3融合蛋白，其包括：

一含有豬生殖和呼吸道征候群病毒(PRRSV)的ORF6部分序列，與PRRSV?ORF5部分序列的N端蛋白區；

一綠膿桿菌外毒素A移位功能部位；以及

一含KDEL-KDEL-KDEL(K3)序列的羧基終端部份。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV為美洲株。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV為歐洲株。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV的該ORF6部分序列為SEQ?ID?NO.13。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV?ORF5部分序列為SEQ?ID?NO.12。

所述的融合蛋白，其中該豬生殖和呼吸道征候群病毒(PRRSV)的部分ORF6及部分ORF5的N端融合蛋白區的核酸序列為SEQ?ID?NO.1。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV的該部分ORF6為SEQ?ID?NO.15。

所述的融合蛋白，其中該PRRSV的該部分ORF5為SEQ?ID?NO.14。

所述的融合蛋白，其中該豬生殖和呼吸道征候群病毒(PRRSV)的部分ORF6及部分ORF5的N端融合蛋白區的核酸序列為SEQ?ID?NO.10。

本發明可作為疫苗的醫藥組合物，其包含：