[發明專利]N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒及N－乙酰－β－氨基葡萄糖苷酶活性濃度的測定方法

無效

• 申請號: 200610097335.5
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173903A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/34;C12Q1/00
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒，同時本發明還涉及測定N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性濃度的測定方法，屬于醫學檢驗測定技術領域。

背景技術

N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)是細胞內溶酶體的一種酸性水解酶。研究結果表明，人體液(血液、尿液)中NAG活力的大小可用作多種疾病的有效輔助診斷指標，檢測體液中NAG活力具有重要的臨床價值。NAG可作為腎損傷一個極為靈敏的指標，由休克引起急性腎功能衰竭患者尿中極度增高，最高可達正常人的1200倍。急性腎小球腎炎、腎病綜合征，毒物或藥物引起的腎毒性反應均可使NAG增加。腎移植后，酶測定可用來判斷有無排斥反應。病理性增高見于各種腎實質性病變，腎移植排異反應，腎毒性藥物使用過多。某些腎小球腎炎、腎病綜合征也有部分升高。

NAG活力的測定主要有熒光分光光度法和可見分光光度法。前者因所需儀器價格昂貴，且對底物溶液配制的要求較高而不宜用作一般醫院的常規檢驗；后者已見報道的方法在各種實驗條件的選定上雖各有千秋，但有的操作麻煩費時，有的所選定的條件或試劑穩定性欠佳，難以滿足臨床檢驗要求。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶循環擴增法(Enzymatic?Recycling?Method)、酶比色法(Enzymatic?ColorimetricMethod)及酶聯法(Couple?Reaction)技術，計量還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性濃度的測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性濃度測定方法原理如下：

這種方法應用N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(EC?3.2.1.30；NAG；N-Acetyl-β-glucoseaminidase)作為作用酶，功能為將苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷酶解產生石碳酸。兒茶酚氧化酶(catechol?oxidase?EC1.10.3.1)作為循環酶和還原型輔酶共同作用：兒茶酚氧化酶的酶促氧化作用產生苯醌(Quinone)；還原型輔酶再將苯醌再次變回石碳酸，使石碳酸不斷地被重復循環利用，同時使還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為氧化型輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算出N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性濃度。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶診斷試劑盒較為理想：

緩沖液?????????????????????????100mmol/L

穩定劑?????????????????????????50mmol/L

還原型輔酶?????????????????????0.25mmol/L

兒茶酚氧化酶???????????????????8000U/L

苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷???????12mmol/L

本發明的N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶活性診斷試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、兒茶酚氧化酶、苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷。

試劑2

緩沖液、穩定劑、兒茶酚氧化酶。

還原型輔酶、兒茶酚氧化酶、苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、穩定劑、苯基-β-乙酰氨基葡萄糖苷。

試劑3

緩沖液、穩定劑、兒茶酚氧化酶。