[發明專利]硒診斷/測定試劑盒及硒的濃度測定方法

無效

• 申請號: 200610097332.1
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173950A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種硒診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定硒濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

硒的生物學意義最早由克山病的病理生理研究所確立，這種疾病首先在中國的15歲以下兒童和妊娠婦女被發現，屬于地方性硒缺乏病。硒的這種缺乏使紅細胞的谷胱甘肽過氧化酶活性降低，出現溶血增加和形成甲基血紅蛋白。由于硒補充不足，引起了骨骼和心肌的肌纖維功能失調。

紅細胞谷胱甘肽超氧化物酶的活性是反映體內硒儲藏的指標，由于硒不能與年老的紅細胞結合，只有血流中的年輕紅細胞可結硒，達到激活谷胱甘肽氧化酶的水平。因此，紅細胞的谷胱甘肽氧化酶至少在補充硒四周后才能被用于監測治療效果，而血漿中的谷胱甘肽氧化酶活性在數天內即可升高。

懷疑硒攝入不足，尤其是在完全胃腸外營養者，臨床癥狀包括肌無力、心肌病以及懷疑慢性腎功能不全。急性中毒癥狀包括眼睛和氣道的刺激與皮炎；慢性中毒的癥狀包括持續性的呼氣或汗液中出現大蒜味，頭痛、上氣道刺激、胃腸道癥狀和神經衰弱。

目前的檢測方法僅有：熒光測定法及原子吸收分光光度測定法可采用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，連續監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定硒濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的硒診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行硒濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明硒濃度測定方法原理如下：

這種方法應用需要硒離子激活的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase；EC?1.11.1.9)酶(偶)聯NAD(P)H氧化酶(NADPH?oxidase；EC?1.6.3.1)酶促反應速率比色法。谷胱甘肽過氧化物酶酶解谷胱甘肽二硫反應產生過氧化氫，再通過NAD(P)H氧化酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，通過測量340nm處吸光度上升的速度，可以測算硒的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明硒診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液?????????????????100mmol/L

穩定劑?????????????????50mmol/L

輔酶???????????????????3mmol/L

谷胱甘肽二硫???????????6mmol/L

谷胱甘肽過氧化物酶?????12000U/L

NAD(P)H氧化酶??????????12000U/L

本發明的硒診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、輔酶、谷胱甘肽二硫、谷胱甘肽過氧化物酶、NAD(P)H氧化酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶、谷胱甘肽二硫。

試劑2

緩沖液、穩定劑、谷胱甘肽過氧化物酶、NAD(P)H氧化酶。

輔酶、谷胱甘肽二硫、谷胱甘肽過氧化物酶、NAD(P)H氧化酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、谷胱甘肽二硫。

試劑3

緩沖液、穩定劑、谷胱甘肽過氧化物酶、NAD(P)H氧化酶。

輔酶、谷胱甘肽二硫、谷胱甘肽過氧化物酶、NAD(P)H氧化酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。