[發明專利]硒診斷/測定試劑盒及硒濃度測定方法

無效

• 申請號: 200610097331.7
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173949A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種硒診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定硒濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

硒的生物學意義最早由克山病的病理生理研究所確立，這種疾病首先在中國的15歲以下兒童和妊娠婦女被發現，屬于地方性硒缺乏病。硒的這種缺乏使紅細胞的谷胱甘肽過氧化酶活性降低，出現溶血增加和形成甲基血紅蛋白。由于硒補充不足，引起了骨骼和心肌的肌纖維功能失調。

紅細胞谷胱甘肽超氧化物酶的活性是反映體內硒儲藏的指標，由于硒不能與年老的紅細胞結合，只有血流中的年輕紅細胞可結硒，達到激活谷胱甘肽氧化酶的水平。因此，紅細胞的谷胱甘肽氧化酶至少在補充硒四周后才能被用于監測治療效果，而血漿中的谷胱甘肽氧化酶活性在數天內即可升高。

懷疑硒攝入不足，尤其是在完全胃腸外營養者，臨床癥狀包括肌無力、心肌病以及懷疑慢性腎功能不全。急性中毒癥狀包括眼睛和氣道的刺激與皮炎；慢性中毒的癥狀包括持續性的呼氣或汗液中出現大蒜味，頭痛、上氣道刺激、胃腸道癥狀和神經衰弱。

目前的檢測方法僅有：熒光測定法及原子吸收分光光度測定法可采用。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶聯法(Couple?Reaction)技術，計量通過酶聯反應生成吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)所導致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定硒濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的硒診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行硒濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明硒濃度測定方法原理如下：

這種方法應用需要硒離子激活的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase；EC?1.11.1.9)(偶)聯過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)酶促反應速率比色法。谷胱甘肽過氧化物酶酶解谷胱甘肽二硫反應，最后生成的過氧化氫在過氧化物酶的作用下，將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400-700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)波長處，測定染料-吲嗒胺色原(Indaminedye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)-含量高低的光吸收大小；通過測量400-700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)處吸光度上升的速度，得出硒濃度大小測定結果。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，如下成分關系的本發明硒診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液???????????????100mmol/L

穩定劑???????????????50mmol/L

谷胱甘肽二硫?????????6mmol/L

過氧化物酶???????????30000U/L

谷胱甘肽過氧化物酶???6000U/L

還原型色原體組合?????0.1-20mmol/L

所述還原型色原體組合(Chromogen)可以是下列28個組合中的任何一個配對組合：

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N，N-雙乙基-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4-雙氯石碳酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯石碳酸磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

仨溴羥基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

雙甲基苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

2，2’-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)

3-甲基-2-苯噻唑酮腙

4-羥基-3-甲氧基苯甲酸

3-甲基-2-苯噻唑酮腙