[發(fā)明專利]硒診斷/測定試劑盒及硒的濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610097329.X
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173947A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種硒診斷/測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定硒濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

硒的生物學(xué)意義最早由克山病的病理生理研究所確立，這種疾病首先在中國的15歲以下兒童和妊娠婦女被發(fā)現(xiàn)，屬于地方性硒缺乏病。硒的這種缺乏使紅細(xì)胞的谷胱甘肽過氧化酶活性降低，出現(xiàn)溶血增加和形成甲基血紅蛋白。由于硒補(bǔ)充不足，引起了骨骼和心肌的肌纖維功能失調(diào)。

紅細(xì)胞谷胱甘肽超氧化物酶的活性是反映體內(nèi)硒儲藏的指標(biāo)，由于硒不能與年老的紅細(xì)胞結(jié)合，只有血流中的年輕紅細(xì)胞可結(jié)硒，達(dá)到激活谷胱甘肽氧化酶的水平。因此，紅細(xì)胞的谷胱甘肽氧化酶至少在補(bǔ)充硒四周后才能被用于監(jiān)測治療效果，而血漿中的谷胱甘肽氧化酶活性在數(shù)天內(nèi)即可升高。

懷疑硒攝入不足，尤其是在完全胃腸外營養(yǎng)者，臨床癥狀包括肌無力、心肌病以及懷疑慢性腎功能不全。急性中毒癥狀包括眼睛和氣道的刺激與皮炎；慢性中毒的癥狀包括持續(xù)性的呼氣或汗液中出現(xiàn)大蒜味，頭痛、上氣道刺激、胃腸道癥狀和神經(jīng)衰弱。

目前的檢測方法僅有：熒光測定法及原子吸收分光光度測定法可采用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，連續(xù)監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定硒濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的硒診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行硒濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明硒濃度測定方法原理如下：

這種方法應(yīng)用需要硒離子激活的谷胱甘肽過氧化物酶(glutathioneperoxidase；EC?1.11.1.9)酶(偶)聯(lián)甲醛脫氫酶(Formaldehydedehydrogenase；EC?1.2.1.1)酶促反應(yīng)速率比色法。谷胱甘肽過氧化物酶酶解谷胱甘肽二硫反應(yīng)產(chǎn)生谷胱甘肽，再通過甲醛脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，通過測量340nm處吸光度上升的速度，可以測算硒的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明硒診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????50mmol/L

輔酶??????????????????3mmol/L

甲醛??????????????????4mmol/L

谷胱甘肽二硫??????????16mmol/L

谷胱甘肽過氧化物酶????6000U/L

甲醛脫氫酶????????????18000U/L

本發(fā)明的硒診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、谷胱甘肽二硫、甲醛、谷胱甘肽過氧化物酶、甲醛脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、谷胱甘肽二硫、甲醛。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、谷胱甘肽過氧化物酶、甲醛脫氫酶。

輔酶、谷胱甘肽二硫、甲醛、谷胱甘肽過氧化物酶、甲醛脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、谷胱甘肽二硫、甲醛。

試劑3

緩沖液、穩(wěn)定劑、谷胱甘肽過氧化物酶、甲醛脫氫酶。

輔酶、谷胱甘肽二硫、甲醛、谷胱甘肽過氧化物酶、甲醛脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測定硒濃度的方法，其輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實(shí)施方式