[發(fā)明專利]鉀診斷/測定試劑盒及鉀濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610097313.9
• 申請日: 2006-10-30
• 公開（公告）號: CN101173936A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鉀診斷/測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定鉀濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

血清鉀三個決定性水平的臨床意義：低于參考值下限，表現(xiàn)低鉀血癥，其原因有腎小管疾病，高醛固酮癥，胰島素過多癥，代謝性堿中毒，利尿劑治療、胰島素治療糖尿病酮癥時鉀離子轉(zhuǎn)移至細(xì)胞內(nèi)等。高于參考值上限，可能由腎小球疾病、腎功能衰弱、糖尿病酮癥中毒、腎上腺皮質(zhì)功能減退等。當(dāng)血鉀高達(dá)7.5mmol/L或以上時病人將出現(xiàn)心律失常，應(yīng)考慮確定適當(dāng)?shù)闹委煼桨浮Ｑ邂洺^10mmol/L時，即可發(fā)生心室纖顫，心臟停搏而死亡。高鉀使心臟停跳于舒張期。

目前鉀測定常用的方法有：同位素稀釋質(zhì)譜法、中子活化法、火焰光度計法、化學(xué)測定法、離子選擇電極法、原子分光光度法、酶動力學(xué)法。

火焰光度法1950年開始使用并一直沿用至今的火焰光度法檢測血清、尿液、腦脊液及胸腹水的Na⁺和K⁺，是一種發(fā)射光譜分析法。測定方法分為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)法和外標(biāo)準(zhǔn)法兩種。外標(biāo)準(zhǔn)法操作誤差較大，一般不采用。現(xiàn)在主要使用內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)法，即標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)液采用加進(jìn)相同濃度的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)元素鋰或銫進(jìn)行測定。操作時，將含鋰的溶液作為稀釋液，同時測定K、Na和Li的濃度，以標(biāo)本與標(biāo)準(zhǔn)液的Na/Li與K/Li比值，計算Na、K濃度。由于血清稀釋倍數(shù)大，血清蛋白質(zhì)粘性的影響幾乎可忽略不計。

化學(xué)測定法主要利用復(fù)環(huán)王冠化合物如穴冠醚或球冠醚，亦稱為冠醚，均為離子載體進(jìn)行測定，由于大環(huán)結(jié)構(gòu)內(nèi)有空穴，分子內(nèi)部氧原子有未共用電子對可與金屬離子結(jié)合，根據(jù)空穴大小，可選擇性結(jié)合不同直徑的金屬離子，從而可達(dá)到測出離子濃度的目的。測定血清K，一般采用普通冠醚陰離子染料進(jìn)行比色定量。

離子選擇電極法ISE法是采用靈敏的特定專用電極，在專用儀器上進(jìn)行血清和尿等體液的K⁺、Na⁺的測定，因標(biāo)本用量少，快速準(zhǔn)確，幾乎有取代其他方法的趨勢。其儀器測定原理是離子選擇電極與參比電極組合浸泡在待測標(biāo)本溶液中，進(jìn)行檢測。目前已有的電極種類為：①玻璃膜電極，感應(yīng)材料為玻璃薄膜的有pH電極、K⁺電極和Na⁺電極；②固相膜電極，由難溶性金屬物質(zhì)加壓成型，以固體膜或單日膜作為感應(yīng)膜的電極有Cl^-電極和F^-電極；③液態(tài)膜電極，將環(huán)氧樹脂或內(nèi)裝聚氯乙稀為感應(yīng)膜的Ca²⁺電極；④用纈氨霉素膜制成的K⁺電極。上述電極均有一定的壽命，因為電極使用一段時間就會自動老化，有效期長短不一。

原子分光光度法原子分光光度法可用于檢測血清K+、Na+，操作繁雜，誤差較大，不及火焰光度法簡便。

鉀測定的決定性方法是同位素稀釋質(zhì)譜法及中子活化法。WHO推薦的方法是火焰光度計法。目前離子選擇電極法應(yīng)用較為普遍，但是電極成本昂貴。

酶測定法和火焰光度計法或離子選擇電極法均有較好的一致性，且抗干擾性強，穩(wěn)定性好，彌補了生化分析儀不能同時測定鉀鈉的不足。有較好的分析性能，易于自動化，在臨床化學(xué)分析中必定取代火焰光度計法成為常規(guī)分析項目。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定鉀濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的鉀診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行鉀濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明鉀濃度測定方法原理如下：

色氨酸+水??色氨酸酶?丙酮酸+氨離子+吲哚

氨離子+2-酮戊二酸酯+還原型輔酶?谷氨酸脫氫酶L-谷氨酸+水+輔酶