[發(fā)明專利]鋅診斷/測(cè)定試劑盒及鋅的濃度測(cè)定方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610097305.4
• 申請(qǐng)日: 2006-10-30
• 公開（公告）號(hào): CN101173931A
• 公開（公告）日: 2008-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/84
• 分類號(hào): G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種鋅診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定鋅濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

鋅與生物的生長(zhǎng)發(fā)育有關(guān)。鋅具有重要的生理功能、營養(yǎng)作用和臨床診療意義。測(cè)定血清鋅及Cu/Zn比值，對(duì)評(píng)價(jià)機(jī)體鋅的營養(yǎng)狀況和對(duì)許多疾病的診療均具有重要的實(shí)用價(jià)值。

鋅的測(cè)定方法包括絡(luò)合滴定法、熒光光度法、比色法、極譜法、原子吸收分光光度法、陽極溶出伏安法和中子活化法等。

絡(luò)合滴定法耗時(shí)費(fèi)力，標(biāo)本用量大，特異性低。

熒光光度法操作簡(jiǎn)單，但需熒光光度計(jì)。

比色法簡(jiǎn)單、快速、靈敏度高，可得到原子吸收法近似的結(jié)果，但是比色法操作復(fù)雜。常用的顯色劑與鋅絡(luò)合后在最大吸收峰的摩爾吸光系數(shù)(L·mol^-1·cm^-1)如下：1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚56000；1-[(5-氯-2-吡啶)偶氮]-2-萘酚69000；4-(2-吡啶偶氮)間苯二酚84000；2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-二乙基氨基酚120000；2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(N-n丙基-N-3-磺化丙氨基)酚130000。比色法一般都要先加鹽酸胍或三氯醋酸等使鋅及其它金屬離子從蛋白結(jié)合物中釋放出來，再加氰化物作掩蔽劑，絡(luò)合除鋅以外的金屬，加水合氯醛作暴露劑，又避免氰化物與鋅的絡(luò)合，使鋅能特異地與吡啶偶氮酚類化合物反應(yīng)顯色。

單掃描示波極譜儀屬小型儀器，操作簡(jiǎn)便，特異性較好，有些實(shí)驗(yàn)室對(duì)此方法較滿意。

原子吸收分光光度法(AAS)具有特異性高(干擾小)、檢出限低(樣品量少)、精密度好(CV＜3.6％＝、回收率達(dá)到99％、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。該法操作較比色法和熒光法簡(jiǎn)單的多，但儀器價(jià)格昂貴，因它能最準(zhǔn)確地分析鋅含量而被推薦為測(cè)鋅的方法。

陽極溶出伏安法是利用沉積在電極上鋅溶出后，測(cè)其陽極電流強(qiáng)度與鋅濃度成正比。

酶法操作最方便，易于自動(dòng)化，價(jià)格低廉，特異性高，精密度好。是非常適合國情的一種檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，連續(xù)監(jiān)測(cè)還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，得以測(cè)定鋅濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的鋅診斷/測(cè)定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行鋅濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明鋅濃度測(cè)定方法原理如下：

磷酸單酯+水??堿性磷酸酶/Zn²⁺??醇類+磷酸根

磷酸根+甘油醛-3-磷酸+輔酶??甘油醛-3-磷酸脫氫酶?

???????????????????????????甘油酸-1，3-雙磷酸+還原型輔酶

這種方法應(yīng)用需要鋅離子激活的堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase；EC?3.1.3.1)酶(偶)聯(lián)甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate?dehydrogenase；EC?1.2.1.59)酶促反應(yīng)速率比色法。堿性磷酸酶酶解磷酸單酯反應(yīng)產(chǎn)生磷酸根，再通過(偶)聯(lián)合甘油醛-3-磷酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，通過測(cè)量340nm處吸光度上升的速度，可以測(cè)算鋅的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明鋅診斷/測(cè)定試劑盒較為理想：

緩沖液??????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑??????????????????50mmol/L

輔酶????????????????????3mmol/L

磷酸單酯????????????????20mmol/L

甘油醛-3-磷酸???????????3mmol/L

堿性磷酸酶??????????????20000U/L

甘油醛-3-磷酸脫氫酶?????12000U/L

本發(fā)明的鋅診斷/測(cè)定試劑盒可以是單劑，包括：