[發明專利]砷診斷/測定試劑盒及砷濃度測定方法

無效

• 申請號: 200610097228.2
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169446A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種砷診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定砷濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

砷普遍存在，特別在自然界的開放水域，海洋食品中含有相當高的砷，高達200mg/kg。典型的歐洲餐食每日砷攝入通常為10mg。砷很快各自經腸道和肺完全吸收。有毒砷化合物包括砷(三氧化砷)和無色氣體砷都非常毒，具有大蒜臭味，毒性劑量5～50mg之間，致命劑量＞50mg。大部分情況下砷從血液到尿液以代謝形式排除，小部分在各組織與巰基團反應，抑制SH-依賴性酶和物質。

檢測方法有：用無火焰氫化物技術原子吸收分光光度法。中子活性分析是最穩定精確方法，因為它不需預處理樣本且檢測范圍非常低，但不是一般實驗室具備這樣的檢測能力。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定砷濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的砷診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行砷濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明砷濃度測定方法原理如下：

蔗糖+磷酸根?????蔗糖磷酸化酶/As?????果糖+葡萄糖-1-磷酸

果糖+還原型輔酶????甘露醇2-脫氫酶????甘露醇+輔酶

這種方法應用需要砷激活的蔗糖磷酸化酶(Disaccharidephosphorylases；EC?2.4.1.7)酶(偶)聯甘露醇2-脫氫酶(mannitoldehydrogenase；EC?1.1.1.67；EC?1.1.1.138)酶促反應速率比色法。蔗糖磷酸化酶酶解蔗糖產生果糖，再通過(偶)聯合甘露醇2-脫氫酶的作用，最終將還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)氧化成為輔酶(在340nm處沒有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度下降的速度，通過測量340nm處吸光度下降的速度，可以測算砷的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發明砷診斷/測定試劑盒較為理想：

磷酸緩沖液????????100mmol/L

穩定劑????????????50mmol/L

還原型輔酶????????0.25mmol/L

蔗糖??????????????20mmol/L

蔗糖磷酸化酶??????10000U/L

甘露醇2-脫氫酶????8000U/L

本發明的砷診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、蔗糖、磷酸根、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶、蔗糖、磷酸根。

試劑2

緩沖液、穩定劑、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶。

還原型輔酶、蔗糖、磷酸根、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

還可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩定劑、還原型輔酶。

試劑2

緩沖液、蔗糖、磷酸根。

試劑3

緩沖液、穩定劑、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶。

還原型輔酶、蔗糖、磷酸根、蔗糖磷酸化酶、甘露醇2-脫氫酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發明測定砷濃度的方法，其還原型輔酶可以是NADPH、NADH或thio-NADH中的一種。

具體實施方式

下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的砷診斷/測定試劑為單試劑，包括：

磷酸緩沖液??????100mmol/L