[發(fā)明專利]乙醇診斷/測(cè)定試劑盒及乙醇的濃度測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610097222.5
• 申請(qǐng)日: 2006-10-24
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101169448A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/98
• 分類號(hào): G01N33/98;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種乙醇診斷/測(cè)定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測(cè)定乙醇濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/環(huán)境檢驗(yàn)測(cè)定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

乙醇具成癮性，酒濫用和酒依賴是當(dāng)今世界范圍內(nèi)最嚴(yán)重的社會(huì)經(jīng)濟(jì)和公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。在西方國(guó)家，酒精相關(guān)性肝病已成為死亡的第六位原因。在我國(guó)，近20年來(lái)，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人均酒消耗量大幅度上升，酒依賴的患病率日趨增高。

生物樣品中乙醇的定量測(cè)定方法主要有化學(xué)比色法，酶終點(diǎn)比色法，均相酶免疫測(cè)定法(EIA)，氣相色譜法(GC)和呼出氣乙醇分析。此外血清滲透量法可作乙醇半定量分析。

有多種化學(xué)比色法曾用于乙醇定量測(cè)定，微量擴(kuò)散法是其中較簡(jiǎn)單實(shí)用的一種，微量溢出的乙醇可使鉻酸還原成藍(lán)色的氧化鉻。

根據(jù)所用的試劑酶不同，乙醇的酶法測(cè)定分為二種：乙醇氧化酶法和乙醇脫氫酶法，與乙醇氧化酶法相比，乙醇脫氫酶法的專一性高，不會(huì)與甲醇和丙酮起催化反應(yīng)。

一般認(rèn)為氣相色譜法可作為參考方法，尤其在準(zhǔn)確性和精密度要求高的法醫(yī)學(xué)乙醇測(cè)定中應(yīng)用最廣。GC法的獨(dú)特優(yōu)點(diǎn)在于特異、靈敏，且能同時(shí)分析多種揮發(fā)性醇類物質(zhì)，如乙醇、甲醇、丙酮、乙醛和異丙醇。

其他乙醇的測(cè)定方法還有：均相酶免疫分析(Homogeneous?enzymeimmunoassay)、滲透量法、呼出氣乙醇分析法；用呼出氣乙醇分析儀檢測(cè)乙醇操作簡(jiǎn)單、快速，在交通執(zhí)法部門(mén)應(yīng)用較多。這類儀器中一種是根據(jù)紅外光吸收原理設(shè)計(jì)的，該法測(cè)定的乙醇濃度與酶法測(cè)得的血乙醇濃度相關(guān)性很好。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，計(jì)量/連續(xù)監(jiān)測(cè)還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長(zhǎng)處吸光度的變化，得以測(cè)定乙醇濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的乙醇診斷/測(cè)定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見(jiàn)光分析儀或半、全自動(dòng)生化分析儀上進(jìn)行乙醇濃度測(cè)定，而且測(cè)定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明乙醇濃度測(cè)定方法原理如下：

乙醇+輔酶??酒精脫氫酶??乙醛+還原型輔酶

這種方法直接應(yīng)用酒精脫氫酶(Alcohol?dehydrogenase；EC1.1.1.1)酶促反應(yīng)速率法/終點(diǎn)比色法。酒精脫氫酶酶解乙醇同時(shí)將輔酶(在340nm處沒(méi)有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測(cè)定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度/速度，通過(guò)測(cè)量340nm處吸光度上升的程度/速度，可以測(cè)算乙醇的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無(wú)論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明乙醇診斷/測(cè)定試劑盒較為理想：

緩沖液????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????50mmol/L

輔酶??????????????3mmol/L

酒精脫氫酶????????12000U/L

本發(fā)明的乙醇診斷/測(cè)定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、酒精脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、酒精脫氫酶。

輔酶、酒精脫氫酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無(wú)論是單劑或雙劑，本發(fā)明測(cè)定乙醇濃度的方法，其輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合實(shí)施例子對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明。

實(shí)施例一

本實(shí)施例的乙醇診斷/測(cè)定試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液????????100mmol/L

穩(wěn)定劑???????????????????????????????50mmol/L

輔酶?????????????????????????????????3mmol/L