[發(fā)明專利]巖藻糖苷酶診斷試劑盒及巖藻糖苷酶活性濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610097221.0
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169368A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25;G01N21/78;C12Q1/00
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種巖藻糖苷酶診斷試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定巖藻糖苷酶活性的方法，屬于醫(yī)學(xué)檢驗測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

1980年法國學(xué)者Deugnier等研究發(fā)現(xiàn)，原發(fā)性肝癌患者血清巖藻糖苷酶升高，并被眾多的研究所證實。故有人提出巖藻糖苷酶可作為原發(fā)性肝癌的腫瘤標志物，與甲胎蛋白聯(lián)合或參照應(yīng)用大大提高了診療價值。近年來研究發(fā)現(xiàn)，巖藻糖苷酶對某些疾病的發(fā)生、發(fā)展均具有重要意義。

血清巖藻糖苷酶測定主要有熒光法和比色法。比色法以4-硝基苯α-L-巖藻吡喃糖苷或4-硝基苯α-L-巖藻糖苷為底物顯色，本法簡便，設(shè)備要求不高，國內(nèi)外廣泛采用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶促反應(yīng)(EnzymaticCatalytic?Reaction)技術(shù)及偶聯(lián)技術(shù)，連續(xù)監(jiān)測340nm波長處吸光度的變化，得以測定巖藻糖苷酶活性的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現(xiàn)該方法的巖藻糖苷酶診斷試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行巖藻糖苷酶活性測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明巖藻糖苷酶活性測定方法原理如下：

巖藻糖苷??巖藻糖苷酶??巖藻糖+相應(yīng)醇類

巖藻糖+輔酶??巖藻糖脫氫酶??巖藻酮糖+還原型輔酶

這種方法應(yīng)用巖藻糖苷酶酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法，巖藻糖苷酶酶解巖藻糖苷釋放巖藻糖，通過巖藻糖脫氫酶的作用產(chǎn)生還原型輔酶，因而在340nm波長處產(chǎn)生吸收峰。將最終反應(yīng)物置于紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀下，檢測還原型輔酶在主波長340nm吸光度上升的速度，測算出巖藻糖苷酶的活性大小測定結(jié)果。

實驗表明，從測定結(jié)果的準確性和配制成本的經(jīng)濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑或雙劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明巖藻糖苷酶診斷試劑盒較為理想：

緩沖液??pH?????????????8.5100mmol/L

穩(wěn)定劑?????????????????20mmol/L

巖藻糖脫氫酶???????????200U/L

巖藻糖苷???????????????5mmol/L

輔酶(氧化型)???????????4mmol/L

本發(fā)明的巖藻糖苷酶診斷試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、巖藻糖脫氫酶、巖藻糖苷、輔酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、巖藻糖脫氫酶、巖藻糖苷。

巖藻糖脫氫酶、巖藻糖苷、輔酶在試劑1或試劑2中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下三劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、巖藻糖苷。

試劑3

緩沖液、穩(wěn)定劑、巖藻糖脫氫酶。

巖藻糖脫氫酶、巖藻糖苷、輔酶在試劑1、試劑2或試劑3中的位置可以不限。試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

無論是單劑、雙劑還是三劑，本發(fā)明測定巖藻糖苷酶活性的方法，其氧化型輔酶可以是NADP⁺、NAD⁺或thio-NAD⁺中的一種。

具體實施方式

下面結(jié)合實施例子對本發(fā)明作進一步的說明。

實施例一

本實施例的巖藻糖苷酶診斷試劑為單試劑，包括：

三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸緩沖液????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑????????????????50mmol/L

巖藻糖脫氫酶??????????200U/L

巖藻糖苷??????????????5mmol/L

輔酶(氧化型)??????????4mmol/L

試劑全部溶解配好后，分裝入瓶，進行冷凍干燥，制成干粉試劑；使用前，加入純凈水，復(fù)溶后使用。