[發(fā)明專利]離子鈣診斷/測定試劑盒及離子鈣濃度的測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610097206.6
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169438A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王爾中
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32;C12Q1/44;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種離子鈣診斷/測定試劑盒，同時(shí)本發(fā)明還涉及測定離子鈣濃度的方法，屬于醫(yī)學(xué)/食品/檢驗(yàn)測定技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

血液中的鈣幾乎全部存在于血漿中，血漿鈣有兩種形式：1非擴(kuò)散性鈣，也稱結(jié)合鈣。它同蛋白質(zhì)結(jié)合，不能透過毛細(xì)血管壁，不具有生理活性，約占鈣的40％；2可擴(kuò)散性鈣，包括離子化鈣，約占總鈣的46％，是具有生理活性的部分。與碳酸氫根、磷酸鹽、檸檬酸、乳酸等陰離子結(jié)合的鈣，約占總鈣的14％。非擴(kuò)散性鈣與擴(kuò)散性鈣可以互相轉(zhuǎn)變并保持動態(tài)平衡。

鈣的生理功能主要為：1構(gòu)成骨骼和牙齒，維持和修補(bǔ)骨骼的完整性；2保持神經(jīng)肌肉的正常應(yīng)激性；3傳導(dǎo)神經(jīng)沖動；4維持細(xì)胞的正常生理通透性；5參與血疑過程；6激活某些酶的活性，如琥珀酸脫氫酶、ATP酶等；7對心肌收縮的影響，ca²⁺有利于心肌收縮，它和有利于心肌舒張的K⁺相拮抗，從而維持心肌正常的收縮與舒張。血鈣與骨骼中的鈣保持動態(tài)平衡。血鈣含量的變化常能反映出骨組織的代謝情況，因此測定血鈣對某些疾病的診斷有幫助。

總鈣的測定方法很多，概括起來有滴定法(氧化還原滴定法、絡(luò)合滴定法)，比色法(方法很多，最常用又便與自動化操作的是鄰甲酚酞合絡(luò)酮法、甲基麝香草酚藍(lán)法、偶氮胂III法等)，火焰光度法、原子吸收分光光度法、同位素稀釋質(zhì)譜法、酶法。國際臨床化學(xué)聯(lián)合(IFCC)推薦的鈣測定決定性方法為同位素稀釋質(zhì)譜法(IDMS)，參考方法為原子吸收分光光度法。世界衛(wèi)生組織(WHO)推薦的中等實(shí)驗(yàn)室用的常規(guī)方法為鄰甲酚酞絡(luò)合酮法(O-CPC)。

離子鈣的測定方法大致有：生物學(xué)法、透析法、超濾法、金屬指示劑法、離子選擇性電極法.目前應(yīng)用最多的是離子選擇性電極法(ISE)。此方法簡便、迅速、重復(fù)性好，正確和敏感性高。測定結(jié)果不受血漿蛋白質(zhì)的影響，能反映機(jī)體鈣代謝的實(shí)際情況。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯(lián)法(Couple?Reaction)技術(shù)，連續(xù)監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定離子鈣濃度的方法，同時(shí)，本發(fā)明還將給出用以實(shí)現(xiàn)該方法的離子鈣診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進(jìn)行離子鈣濃度測定，而且測定速度快、準(zhǔn)確度高，因而可以得到切實(shí)的推廣應(yīng)用。

本發(fā)明離子鈣濃度測定方法原理如下：

這種方法應(yīng)用需要鈣離子才能激活的磷脂酶-A2(phospholipaseA2；EC?3.1.1.4)酶(偶)聯(lián)甲酸脫氫酶(formate?dehydrogenase；EC1.2.1.2；EC?1.2.1.43)酶促反應(yīng)連續(xù)監(jiān)測法。磷脂酶-A2酶解磷脂反應(yīng)產(chǎn)生1-酰基甘油磷基膽堿(1-acylglycerophosphocholine)及甲酸，再通過(偶)聯(lián)合甲酸脫氫酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的程度，通過測量340nm處吸光度上升的程度，可以測算離子鈣的濃度大小。

實(shí)驗(yàn)表明，從測定結(jié)果的準(zhǔn)確性和配制成本的經(jīng)濟(jì)性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關(guān)系的本發(fā)明離子鈣診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液??????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑??????????????????????50mmol/L

輔酶????????????????????????3mmol/L

磷脂????????????????????????16mmol/L

磷脂酶-A2???????????????????10000U/L

甲酸脫氫酶??????????????????16000U/L

本發(fā)明的離子鈣診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、磷脂、磷脂酶-A2、甲酸脫氫酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、磷脂。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、磷脂酶-A2、甲酸脫氫酶。