[發明專利]離子鈣診斷/測定試劑盒及離子鈣濃度的測定方法

無效

• 申請號: 200610097203.2
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169435A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種離子鈣診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定離子鈣濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

血液中的鈣幾乎全部存在于血漿中，血漿鈣有兩種形式：1非擴散性鈣，也稱結合鈣。它同蛋白質結合，不能透過毛細血管壁，不具有生理活性，約占鈣的40％；2可擴散性鈣，包括離子化鈣，約占總鈣的46％，是具有生理活性的部分。與碳酸氫根、磷酸鹽、檸檬酸、乳酸等陰離子結合的鈣，約占總鈣的14％。非擴散性鈣與擴散性鈣可以互相轉變并保持動態平衡。

鈣的生理功能主要為：1構成骨骼和牙齒，維持和修補骨骼的完整性；2保持神經肌肉的正常應激性；3傳導神經沖動；4維持細胞的正常生理通透性；5參與血疑過程；6激活某些酶的活性，如琥珀酸脫氫酶、ATP酶等；7對心肌收縮的影響，ca²⁺有利于心肌收縮，它和有利于心肌舒張的K⁺相拮抗，從而維持心肌正常的收縮與舒張。血鈣與骨骼中的鈣保持動態平衡。血鈣含量的變化常能反映出骨組織的代謝情況，因此測定血鈣對某些疾病的診斷有幫助。

總鈣的測定方法很多，概括起來有滴定法(氧化還原滴定法、絡合滴定法)，比色法(方法很多，最常用又便與自動化操作的是鄰甲酚酞合絡酮法、甲基麝香草酚藍法、偶氮胂III法等)，火焰光度法、原子吸收分光光度法、同位素稀釋質譜法、酶法。國際臨床化學聯合(IFCC)推薦的鈣測定決定性方法為同位素稀釋質譜法(IDMS)，參考方法為原子吸收分光光度法。世界衛生組織(WHO)推薦的中等實驗室用的常規方法為鄰甲酚酞絡合酮法(O-CPC)。

離子鈣的測定方法大致有：生物學法、透析法、超濾法、金屬指示劑法、離子選擇性電極法.目前應用最多的是離子選擇性電極法(ISE)。此方法簡便、迅速、重復性好，正確和敏感性高。測定結果不受血漿蛋白質的影響，能反映機體鈣代謝的實際情況。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(Enzymatic?Colorimetric?Method)及酶聯法(Couple?Reaction)技術，連續監測通過酶聯反應生成吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)，所導致在400-700nm波長處吸光度的上升，得以測定離子鈣濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的離子鈣診斷/測定試劑盒，采用該試劑盒不僅可以在可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行離子鈣濃度測定，而且測定速度快、靈敏度大、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明離子鈣濃度測定方法原理如下：

還原型輔酶+氧NAD(P)H氧化酶/Ca²⁺輔酶+過氧化氫

過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水

這種方法應用NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H?oxidase；EC?1.6.3.1)需要鈣離子才能激活酶活性的酶促反應速率比色法。在鈣離子的催化下，NAD(P)H氧化酶(NAD(P)H?oxidase；EC?1.6.3.1)酶解反應產生過氧化氫，再通過(偶)聯合過氧化物酶(peroxidase；EC?1.11.1.7)的作用，最終將無色的還原型色原體組合氧化成有色的染料，從而可以通過可見光分析儀器，在400700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)波長處，測定染料，吲嗒胺色原(Indamine?dye)或醌亞胺色原(Quioneimine?dye)，含量高低的光吸收大小，通過測量400-700nm(根據還原型色原體組合的不同而定)處吸光度上升的速度，得出離子鈣濃度大小測定結果。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，如下成分關系的本發明離子鈣濃度診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液?????????????????????????????????100mmol/L

穩定劑?????????????????????????????????50mmol/L

還原型輔酶?????????????????????????????0.25mmol/L

NAD(P)H氧化酶??????????????????????????6000U/L

過氧化物酶1????????????????????????????5000U/L