[發(fā)明專利]銅診斷/測定試劑盒及銅濃度測定方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610096887.4
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101221187A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發(fā)明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/26;C12Q1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發(fā)明涉及一種銅診斷/測定試劑盒，同時本發(fā)明還涉及測定銅濃度的方法，屬于醫(yī)學/食品/環(huán)境檢驗測定技術領域。

背景技術

正常成人體內含銅量為80～150mg，血循環(huán)銅占總銅量的10％。血漿中約95％銅a₂球蛋白牢固結合，稱為銅藍蛋白(Ceruloplasmin)，經酸處理后才能與銅試劑反應。其余5％為游離銅。許多酶都含有銅，如細胞色素氧化酶、超氧化物岐化酶、尿酸氧化酶、賴氨酸氧化酶、酪氨酸酶、多巴胺β-羥化酶等。與白蛋白疏松結合的銅是運輸、吸收、排泄的重要形式和中間環(huán)節(jié)，也是合成各種細胞蛋白的原料。其它銅蛋白還有血銅蛋白、肝蛋白和腦銅蛋白。銅參與造血過程，主要影響鐵的吸收、運送和利用。

生物體液與組織中銅的測定方法包括分光光度法，火焰和無火焰原子吸收分光光度法、發(fā)射光譜法、中子活化分析法和陽極溶出伏安法等。銅的分光光度法都是利用銅形成有色絡合物。火焰原子吸收法利用銅離子在火焰中被還原為Cu⁰，從銅空心陰極燈發(fā)出的光波Cu⁰吸收的量與濃度成正比，用于血清、尿、組織中銅的測定。陽極溶出伏安法是將銅離子作為汞齊被鍍于陽極上，電壓變得更正，使Cu從陽極“剝下”或再次溶解，形成的電流與Cu的濃度成正比，廣泛應用于環(huán)境分析。中子活化分析是利用中子將⁶³Cu轉變成不穩(wěn)定⁶⁴Cu同位素，后者衰變時釋放γ射線可在1。34MeV計數，應用于特定研究中心。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，計量/連續(xù)監(jiān)測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定銅濃度的方法，同時，本發(fā)明還將給出用以實現該方法的銅診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行銅濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發(fā)明銅濃度測定方法原理如下：

賴氨酸+氧+水??賴氨酸氧化酶/Cu²⁺??6-氨基-2-氧代己酸

??????????????????????????????????????????+氨+過氧化氫

氨+肌苷單磷酸+輔酶??鳥苷單磷酸還原酶??鳥苷單磷酸

??????????????????????????????????????+還原性輔酶

這種方法應用需要銅激活的賴氨酸氧化酶(lysine?oxidase；EC1.4.3.13；EC?1.4.3.14)酶(偶)聯鳥苷單磷酸還原酶(Guanosine5′-phosphate?reductase；EC?1.7.1.7)酶促反應速率比色法。賴氨酸氧化酶酶解賴氨酸反應產生氨，再通過(偶)聯合鳥苷單磷酸還原酶的作用，最終將輔酶(在340nm處沒有吸收峰)還原成為還原型輔酶(在340nm處有吸收峰)，從而得以測定還原型輔酶在340nm處吸光度上升的速度，通過測量340nm處吸光度上升的速度，可以測算銅的濃度大小。

實驗表明，從測定結果的準確性和配制成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下成分關系的本發(fā)明銅診斷/測定試劑盒較為理想：

緩沖液?????????????????????100mmol/L

穩(wěn)定劑?????????????????????50mmol/L

輔酶???????????????????????3mmol/L

賴氨酸?????????????????????20mmol/L

肌苷單磷酸?????????????????16mmol/L

賴氨酸氧化酶???????????????12000U/L

鳥苷單磷酸還原酶???????????16000U/L

本發(fā)明的銅診斷/測定試劑盒可以是單劑，包括：

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、賴氨酸、肌苷單磷酸、賴氨酸氧化酶、鳥苷單磷酸還原酶。

試劑盒可以是干粉狀態(tài)，在使用前加水溶解后使用；也可以配制成液體試劑，直接使用。

也可以將上述單劑試劑配成如下雙劑試劑：

試劑1

緩沖液、穩(wěn)定劑、輔酶、賴氨酸、肌苷單磷酸。

試劑2

緩沖液、穩(wěn)定劑、賴氨酸氧化酶、鳥苷單磷酸還原酶。