[發明專利]二氧化碳診斷/測定試劑盒及二氧化碳濃度的測定方法

無效

• 申請號: 200610096880.2
• 申請日: 2006-10-24
• 公開（公告）號: CN101169422A
• 公開（公告）日: 2008-04-30
• 發明（設計）人: 王爾中
• 申請（專利權）人: 蘇州艾杰生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/84
• 分類號: G01N33/84;G01N21/78;G01N21/25;C12Q1/32
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技術領域

本發明涉及一種二氧化碳診斷/測定試劑盒，同時本發明還涉及測定二氧化碳濃度的方法，屬于醫學/食品/環境檢驗測定技術領域。

背景技術

血液內二氧化碳的含量對人體內酸堿平衡的調節起著重要的作用。血液pH的恒定是維持生命活動必不可少的條件，血漿中的多種緩沖系統中以碳酸氫鹽緩沖系統最為重要，直接影響血液的pH。

血液內二氧化碳的含量變化主要反映代謝性酸堿平衡紊亂。單純代謝性酸或堿中毒時，血液碳酸氫根[HCO₃^-]下降或升高，總二氧化碳也隨之下降或升高。而單純呼吸性酸或堿中毒時，血液碳酸氫根升高或下降。

總二氧化碳和碳酸氫根的測定方法較可分為直接測定和間接推算兩類。直接測定主要有量氣法、量壓法、滴定法、比色法、Conway微量擴散法、流動注射氣體擴散法等。間接推算是利用血氣分析儀測得的PH與PCO₂，根據H-H方程的變換形式：

HCO₃^-(m?mol/L)＝0.03×PCO₂(mm?Hg)×antilog(PH-p?ka)或

HCO₃^-(m?mol/L)＝0.225×PCO₂(k?Pa)×antilog(PH-p?Ka)

計算獲得。

式中：PH為37℃時測得值，p?ka在37℃為6.10。

目前，以間接推算法應用較普遍，由血液分析儀的微處理計算機并與血氣分析結果一起報告，準確性基本可以符合臨床要求。

直接測定法以滴定法應用最廣泛，但由于受多種因素影響，測定誤差較大。

酶法測定適合自動化分析，結果可靠，應當是很有前途的測定方法，但目前尚有待深入研究。

檢索中國專利發現，申請號為96190276.0、申請日為1996.02.06的發明專利申請公開了一種用來導出病人血液中氣體含量的非侵入性的系統和方法。該系統相應于體積測量呼氣中的二氧化碳濃度。然后處理該數據導出動脈血中二氧化碳氣體水平。若數據為時間域，處理可將時間域數據轉換成體積域。該方法也經迭代評估了多個變量的顯著性，所得的關系可供快速和準確地對健康人和患肺病病人進行血中氣體含量的測定。近年來，申請號為02282386.7、申請日為2002.10.29的實用新型專利公開了一種醫用的血液碳酸氫根測定儀，主要由操作面板、進樣檢測機構、定滴加液機構、攪拌機構和以單片機為主控元件的電器控制部分組成。其操作面板包括有手動按鍵、輸入鍵盤和顯示屏；進樣檢測機構由沿圓周均布樣本孔且在孔內放置樣本瓶的樣本轉盤和豎直裝配在轉盤下面的驅動電機及對應于檢測位樣本孔設置的光電檢測器組成；定滴加液機構由配置電機的微量泵和設置于樣本孔上方的定滴頭及配置在定滴頭滴液口處的計滴器組成；攪拌機構由設置在樣本轉盤下方相應位置的攪拌電機和裝配在攪拌電機軸上的磁盤及放置于樣本瓶內的攪拌棒組成。

以上專利均與酶法測定無關，這從一個側面說明，國內此方面的實驗研究十分缺乏。

發明內容

本發明要解決的技術問題是：提出一種利用酶比色法(EnzymaticColorimetric?Method)及酶(偶)聯法(Couple?Reaction)技術，監測還原型煙酰胺輔酶(還原型輔酶)在340nm波長處吸光度的變化，得以測定二氧化碳濃度的方法，同時，本發明還將給出用以實現該方法的二氧化碳診斷/測定試劑盒，采用該試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或半、全自動生化分析儀上進行二氧化碳濃度測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。

本發明二氧化碳濃度測定方法原理如下：

二氧化碳+乙酸+亞鐵細胞色素b1???丙酮酸脫氫酶

??????????????????????丙酮酸+高鐵細胞色素b1+水

丙酮酸+氨離子+還原型輔酶??丙氨酸脫氫酶??L-丙氨酸

???????????????????????????????????????+水+輔酶