[發明專利]可復制型DNA疫苗載體pSFVax1－IRES及其構建方法

無效

• 申請號: 200610072218.3
• 申請日: 2006-04-13
• 公開（公告）號: CN101053663A
• 公開（公告）日: 2007-10-17
• 發明（設計）人: 于繼云;閻瑾琦;劉荷中;修冰水;劉國棟;陳興;賈銳;黃悅;王浩
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;C12N15/85;A61P35/00
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技術領域

本發明屬于腫瘤生物治療領域，涉及一種可復制型DNA疫苗載體的構建與制備。

背景技術

常規DNA疫苗有可能與宿主細胞基因組發生整合，從而引起宿主細胞的轉化；并且DNA疫苗不能在體內復制，外源基因的表達水平低，達不到所需要的免疫效果[Nichols?W?W，Ledwith?B?J，Manam?S?V，et?al.Potential?DNAvaccine?integration?into?host?cell?genome.[J]Ann?N?Y?AcadSci，1995，772：30-39.]。這些局限性促使研究人員去研發更安全、高表達、免疫效果更好的疫苗。近年來用具有“自主復制”功能的RNA病毒復制元件構建的復制型DNA疫苗克服了常規DNA疫苗、RNA疫苗以及RNA復制子疫苗的缺點，顯示出很好的應用前景。所謂“自主復制”的RNA疫苗(即RNA復制子疫苗)，是在具有“自我復制”功能的RNA病毒的基礎上構建而成的。這類RNA病毒主要是披膜病毒科的甲病毒，如辛德比斯病毒(SIN)、塞姆利基森林病毒(SFV)、以及委內瑞拉馬腦炎病毒(VEE)等。這種RNA病毒在利用自身的RNA復制酶實現自我復制的同時，也實現了外源基因的高效表達。但該疫苗雖然在外源基因高效表達上有了突破性進展，而RNA的穩定性差所帶來的生產、儲存、運輸不便的問題仍未解決，因此RNA復制子疫苗的應用還是受到了一定的限制。

用具有“自主復制”功能的RNA病毒復制元件構建的復制型DNA疫苗，則克服了上述缺點，并保留了“自主復制”型RNA疫苗的優點。1)RNA復制酶使得該疫苗具有自我復制能力，介導RNA復制子在細胞質中的大量自我復制，因此外源基因可以得到高效表達[Hariharan?M?J，Driver?D?A，Townsend?K，et?al.DNA?immunization?against?herpes?simplex?virus：enhanced?efficacy?using?aSindbis?virus-based?vector[J].J?Virol，1998，72(2)：950-958.]。2)復制型DNA疫苗可以產生CTL反應和抗體應答，同時還可誘導黏膜免疫和全身免疫，因此該疫苗的免疫效果較好[Lee?JS，Hadjipanayis?AG，Welkos?SL.Venezuelan?equineencephalitis?virus-vectored?vaccine?protect?mice?against?anthrax?sporechallenge.[J].Infect?Immun，2003，71：1491.]。表達產物在APC內經蛋白酶復合體降解成短肽片段后，一部分在內質網上與MHC-I類分子結合，然后表達于細胞膜表面，激活CD8+T細胞，引發CTL反應，從而產生細胞免疫反應。另一部分短肽進入溶酶體內體區與MHC-II類分子結合后運至APC表面，激發CD4+T細胞克隆的增殖、分化，從而促進B細胞的增殖分化，產生抗體，誘發體液免疫反應[Frolov?I，Hoffman?TA.Alphavirus-based?expression?vectors：Strategies?and?applications.[J]Proc?Natl?Acad?Sci?USA，1996，93：11371.]。3)該疫苗的自我復制、轉錄表達均發生于細胞質中，而且最終會誘導被轉染細胞的凋亡，從而消除了與宿主細胞基因組整合的危險性，提高了安全性[LeitnerW?W，Ying?H，Driver?D?A，et?al.Enhancement?of?tumor-specific?immune?responsewith?plasmid?DNA?replicon?vectors.[J]Cancer?Res，2000，60：51-55.]。4)由于DNA的理化性質比較穩定，體外不易降解，所以該疫苗的穩定性較好，便于生產、儲存和運輸。基于上述優點，作為一種新型疫苗，復制型DNA疫苗已經在許多疾病模型上展示出了良好的免疫效果。[Nordstrom?EK，Forsell?MN，Barnfield?C，et?al.Enhanced?immunogenicity?using?an?alphavirus?replicon?DNAvaccine?against?human?immunodeficiency?virus?type?1.[J].J?Gen?Virol.2005，86：349-354.][Otten?GR，Schaefer?M，Doe?B，et?al..Enhanced?potency?of?plasmidDNA?microparticle?human?immunodeficiency?virus?vaccines?in?rhesus?macaquesby?using?a?priming-boosting?regimen?with?recombinant?proteins.[J].J?Virol.2005，79(13)：8189-8200.][Quintana-Vazquez?D，Vazquez-Blomquist?DM，GalbanRodriguez?E，et?al.A?vaccination?strategy?consisting?of?SemlikiForest-virus(SFV)DNA?prime?and?fowlpox-virus?boost?significantly?protects?mice?from?arecombinant(HIV-1)vaccinia-virus?infection.[J].Biotechnol?Appl?Biochem.2005，41：59-66.]