[發明專利]臭參多糖硫酸酯及其用途

無效

• 申請號: 200610048683.3
• 申請日: 2006-09-21
• 公開（公告）號: CN101058610A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發明（設計）人: 趙聲蘭;賁昆龍;陳朝銀;曹筱梅
• 申請（專利權）人: 云南中醫學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/715;A61K9/00;A61P37/00;A61P31/22
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技術領域

本發明涉及一種生物活性臭參多糖硫酸酯及用途。該臭參多糖硫酸酯具有較強的抗人艾滋病病毒的活性，毒性低，在制備預防或治療人艾滋病病毒感染的殺微生物劑方面有很好的應用前景。

背景技術

不少學者注意到硫酸酯化多糖對多種囊膜病毒包括艾滋病病毒(HIV)等有廣譜抗病毒作用。由于這類硫酸酯多糖經口服后難以被消化道粘膜吸收，如果通過注射途徑用藥，在血液內多糖又往往會引起一定的副作用，因此一直未能作為治療艾滋病的藥物上市。國外已將此類化合物作為陰道或直腸局部用藥(即microbicides殺微生物劑)進入III期臨床試驗，并有良好的應用前景。特別是全球艾滋病毒感染者中，90％是通過性傳播引起的。且性傳播使越來越多的婦女感染HIV，全球新感染者中，婦女的比例逐年上升，有的國家已達58％。目前，除了宣傳教育和行為干預之外，常用的阻止HIV性傳播的技術手段主要是安全套，但安全套需男性主動使用，在免費發放安全套的國家，持久使用安全套的性行為只占17％。因此，研制可由女方自主和安全使用，并且能有效預防艾滋病毒性傳播的藥物，對預防艾滋病在我國，乃至全球的流行至關重要。殺微生物劑(microbicides)就是一種由女性主動使用的，能預防HIV和其它性傳播病原體性傳播的新型藥物。當前國際上已把殺微生物劑作為預防HIV性傳播的首選新策略和新技術進行研究。

另外，生殖器皰疹是最常見的性傳播疾病(STDs)之一，全世界有1億多人受到皰疹病毒(HSV)感染，約75％生殖器皰疹病例由HSV-2引起。粘膜上皮的皰疹性損害形成病理性創傷和CD4細胞的聚集，給HIV-1感染提供了極為便利的條件。因此，當前把預防和治療生殖道皰疹病毒感染，看作是減少艾滋病毒性傳播的可行和實用的措施之一。

由于多糖結構的復雜性，某一確定多糖的硫酸酯化修飾物的抗HIV活性高低不同。迄今還未有從植物臭參多糖經磺化劑酯化而得的臭參多糖硫酸酯及其具有較強的抗艾滋病病毒作用的報道，臭參多糖硫酸酯的應用也尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是以臭參多糖為原料，研制一種抗HIV和HSV活性較高的化合物-臭參多糖硫酸酯。

本發明提供了一種生物活性臭參多糖硫酸酯的制備方法，其中制備步驟如下：

1、將臭參(Codonopsis?bulleyana)多糖加入磺化劑中，控溫攪拌反應；

2、反應結束后取出燒瓶冷至室溫，用堿溶液中和至pH為6.0-8.0，醇沉得沉淀，用醇洗滌沉淀；

3、然后沉淀于蒸餾水中透析，透析內液減壓蒸餾濃縮；

4、接著用乙醇沉淀，沉淀經真空干燥即得本發明的臭參多糖硫酸酯。

其中，步驟1中的臭參多糖系用以下方法制備：稱取20克臭參粉，加入蒸餾水500ml浸泡1小時后進行勻漿，微沸熱水回流浸提1小時，離心去沉淀，將上清液加入2倍體積95％乙醇靜置過夜得到沉淀，沉淀按照張惟杰主編的《糖復合物生化研究技術》(第二版，浙江大學出版社，1999年8月)所述的Sevage法除蛋白質后真空冷凍干燥即得臭參多糖。

步驟1中所述的磺化劑由氯磺酸與甲酰胺或吡啶組成，前者與后者的體積比為1∶5-10。反應溫度為60℃至106℃，優選70℃至90℃，首選75℃。磺化劑與臭參多糖的重量比為5∶1至15∶1，優選8∶1至12∶1，首選10∶1。反應時間為8至24小時，優選10至20小時，首選12小時。

步驟2中的堿選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸氫鈉或碳酸氫鉀中的一種或幾種，優選氫氧化鈉或氫氧化鉀，首選氫氧化鈉。

步驟2和步驟4中所用的醇為甲醇或乙醇，優選乙醇，首選乙醇。

所得臭參多糖硫酸酯分子量為15～30kd，單糖組成為木糖、果糖、葡萄糖組成(見附圖1)，為吡喃糖構型(見附圖2、3)，由1→6(或非還原末端)、1→4(2)及1→3糖苷鍵連接無1→2糖苷鍵。硫酸酯化度0.5～2.5。

本發明對所得臭參多糖硫酸酯抗人艾滋病病毒和人單純皰疹病毒的作用進行了實驗檢測。藥效學試驗證明該多糖硫酸酯具有較高的抗人艾滋病病毒和人單純皰疹病毒的作用，對人體細胞和乳酸桿菌毒性低，抗艾滋病病毒的活性穩定，可制備成預防或治療人艾滋病病毒和皰疹病毒感染的制劑。

附圖說明

附圖1??D-木糖高效液相色譜分析結果。峰1為溶劑峰，峰2為D-木糖峰(保留時間6.617min)。

附圖2??D-果糖高效液相色譜分析結果。峰1為溶劑峰，峰2為D-果糖峰(保留時間9.131min)。