[發(fā)明專利]一種莽草酸生產(chǎn)菌株及其構(gòu)建方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200610030985.8
• 申請日: 2006-09-08
• 公開（公告）號: CN101139566A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊晟;鄭華寶;胡世元;楊俊杰;孫周通;范文超;黃鶴;詹劍;蘆銀華;姜世民;王金剛;李宇偉;陳磊;關(guān)春鴻;邵麗君;刁劉洋;陳軍;楊蘊(yùn)劉;姜衛(wèi)紅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/09;C12P7/42;C12R1/19
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司
• 代理人: 繆利明

1.一種莽草酸生產(chǎn)菌株的構(gòu)建方法，其特征在于包括以下步驟：

A、構(gòu)建aroL和aroK雙基因敲除的菌株W3110(ΔaroL?ΔaroK)；

B、構(gòu)建含有莽草酸代謝途徑中的關(guān)鍵基因aroF、aroE、aroB、ppsa以及tktA基因的重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT；

C、將重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT轉(zhuǎn)入雙敲除菌株W3110(ΔaroL?ΔaroK)獲得表達(dá)莽草酸的生產(chǎn)菌株。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A包括：

a、構(gòu)建aroL單基因敲除的菌株BW25113(ΔaroL)；

b、構(gòu)建aroK單基因敲除的菌株BW25113(ΔaroK)；

c、分別以BW25113(ΔaroL)和BW25113(ΔaroK)作為供體和受體，通過P1噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)方法獲得aroL和aroK雙基因敲除菌株BW25113(ΔaroLΔaroK)；

d、以雙敲除菌株BW25113(ΔaroLΔaroK)作為供體，W3110作為受體，利用P1噬菌體轉(zhuǎn)導(dǎo)方法獲得雙敲除菌株W3110(ΔaroLΔaroK)。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟B包括依次將aroF、aroE、aroB、ppsa以及tktA基因克隆至pSU2718質(zhì)粒，獲得重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT所含的aroF基因帶有自身啟動子。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT所含的aroE基因帶有trc啟動子。

6.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT所含的ppsa基因帶有自身啟動子。

7.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟C包括將大腸桿菌宿主菌W3110(ΔaroLΔaroK)制成感受態(tài)細(xì)胞，然后用化學(xué)轉(zhuǎn)化方法將重組表達(dá)質(zhì)粒pSUFEBPT轉(zhuǎn)入所述感受態(tài)細(xì)胞，從而獲得莽草酸生產(chǎn)菌株。

8.如權(quán)利要求1～7中任一項(xiàng)所述的方法構(gòu)建的莽草酸生產(chǎn)菌株。

9.如權(quán)利要求8所述的莽草酸生產(chǎn)菌株，其特征在于，該菌株的保藏號為CCTCC?M206083。

10.一種莽草酸的生產(chǎn)方法，其特征在于，通過發(fā)酵培養(yǎng)權(quán)利要求8或9的莽草酸生產(chǎn)菌株獲得莽草酸。