[發(fā)明專(zhuān)利]重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子－2生物活性測(cè)定方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610030696.8
• 申請(qǐng)日: 2006-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101134978A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃陽(yáng)濱;張翊;任軍;孫九如;徐曉燕;應(yīng)勖
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海新生源醫(yī)藥研究有限公司;上海新生源生物醫(yī)藥有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/04
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/04;G01N33/68
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2生物活性測(cè)定方法，其步驟包括：(a)用改良方法培養(yǎng)NIH3T3細(xì)胞株；(b)細(xì)胞接種；(c)細(xì)胞饑餓處理；(d)加入重組人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子-2進(jìn)行檢測(cè)；

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于步驟(a)中所用培養(yǎng)基配方和配制方法如下：

(A)HEPES?7.2克；碳酸氫鈉1克；L-谷胺酰胺0.4克；DMEM粉末(低糖)2包；用純化水溶解，定容至2L；

(B)Ph值小于7.0；溶解條件：室溫；

(C)試劑完全溶解后，無(wú)菌過(guò)濾，再分裝在500ml的培養(yǎng)瓶中，取出其中的一瓶放置4℃?zhèn)溆茫溆嗑胖迷?20℃保存；

(D)PS均進(jìn)行無(wú)菌分裝-20℃保存，使用基礎(chǔ)培養(yǎng)液時(shí)再按照比例加：PS1∶100；

3.如權(quán)利要求1所述的方法，步驟(b)中細(xì)胞接種密度控制在(6000-8000個(gè)/孔)范圍內(nèi)；

4.如權(quán)利要求1所述的方法，步驟(c)中細(xì)胞饑餓時(shí)間在20-26hr；

5.如權(quán)利要求1所述的方法，其步驟(D)特征為：??在24孔板內(nèi)將樣品2倍梯度的稀釋?zhuān)〕黾?xì)胞板內(nèi)殘留饑餓液后，將梯度稀釋后的樣品加入細(xì)胞板內(nèi)，72小時(shí)以內(nèi)，加入加入MTT顯色反應(yīng)5小時(shí)，取出參與的培養(yǎng)基，加入DMSO溶解結(jié)晶，570nm比色。