[發明專利]采油用假單胞菌屬菌株篩選方法及應用

無效

• 申請號: 200610030448.3
• 申請日: 2006-08-25
• 公開（公告）號: CN101130806A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發明（設計）人: 翁天波
• 申請（專利權）人: 上海中油企業集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04;E21B43/22;C12R1/38
• 代理公司: 上海光華專利事務所
• 代理人: 余明偉

技術領域

本發明涉及一種微生物采油用菌種的篩選及培養方法技術領域。

背景技術

地下原油經過傳統的一次、二次開采后，仍有大部分滯留于地下，需要用新技術來提高其開采效率，微生物采油即是這樣一種通過微生物或其代謝產物來提高原油開采效率的新技術。許多油田已經進行了微生物采油的礦場試驗，并且取得很好的效果。篩選能適應地層條件且能以原油為碳源進行生長的菌種成為微生物采油的關鍵問題。許多科研人員都已經在實驗室分離到了這種微生物，而且室內實驗都取得了一定的效果。大慶油田是我國最大的油田，地下油層溫度在45℃左右，非常適合微生物的生長，因此本發明篩選得到在厭氧條件下能以石油為碳源生長繁殖的菌種。

發明內容

本發明目的是提供一種采油用微生物菌種，從而提高微生物采油效果。

本發明所說的采油用假單胞菌屬菌株篩選方法如下：

菌種來自油田產出液、含油廢水及長期被原油污染的土壤，將菌種接種于富集培養基中，置于45℃、100～120r/min的搖床培養7～10d，然后每天取樣涂原油平板，分離菌種；將篩選到的菌種接種于斜面培養基上培養1～2d，用無菌水制成菌懸液，接種于富集培養基中，置于45℃、100～150r/min的搖床培養2d，離心收集油相；菌種活化后接入種子瓶，將45℃培養1d得到的種子液接入裝有不同鹽濃度溶液的搖瓶中進行耐鹽實驗，培養數天后用平板計數法檢查活菌數，篩選得到4株以原油為碳源生長較快的假單胞菌屬菌株(編號為M21、M22、M23、M24)。

上述培養基培養基組成(g/L)：

富集培養基：

原油2，NaCl0.5，(NH4)2SO40.1，MgSO4·7H2O?0.025，NaNO30.2，NaH2PO40.5，K2HPO4·3H2O1.0

斜面培養基：蛋白胨0.6，NaCl?0.5，酵母膏0.2；pH值7.2～7.4

發酵培養基：

酵母膏0.1，葡萄糖2.0，NaCl?0.5，(NH4)2SO40.1，MgSO4·7H2O?0.025，KH2PO40.2，K2HPO41.0；pH值7.2

按《簡明第八版伯杰氏細菌鑒定手冊》進行菌種鑒定。用Brookfield數字黏度計測量原油的黏度。用瑞典Thermo?Met?ric?AB公司制造的新型熱導式微量量熱計(熱活性檢測系統)檢測以烴類為唯一碳源生長的菌種活性[16]。用JzhY12180型表面張力測定儀測定表面張力，測量溫度為25℃。

菌種活化后接入種子瓶。將45℃培養1d得到的種子液接入裝有不同鹽濃度溶液的搖瓶中進行耐鹽實驗，培養數天后用平板計數法檢查活菌數。將種子液加入高壓容器內，排凈空氣，密封后放入恒溫水浴中，根據需要調節溫度和壓力，進行耐溫、耐壓實驗比較高溫、高壓培養前后菌數的變化。

本發明有益效果：從油田產出液、含油廢水及長期被原油污染的土壤中篩選到的4株菌初步鑒定為假單胞菌屬厭氧菌，在長鏈烷烴中生長效果好于在短鏈烷烴中，對原油均有一定降黏效果(降黏率最高達28％)，對鹽、溫度和壓力都有一定的耐受能力。其中，M23菌在以原油為碳源培養時產生酸類物質和表面活性物質，在室內條件下封閉48h后，其發酵液能使原油采收率提高8.8％左右，表明M23菌在MEOR應用中潛力很大。另外的3株菌也具有一定的降黏、耐溫、耐鹽性能，在MEOR和微生物處理石油污染物方面也將有很好的應用前景，但更細致的研究工作有待進行。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發明作進一步的說明：

實驗材料和篩選結果

菌種來自油田產出液、含油廢水及長期被原油污染的土壤。

培養基培養基組成(g/L)

富集培養基：原油2，NaCl?0.5，(NH4)2SO40.1，MgSO4·7H2O?0.025，NaNO30.2，NaH2PO40.5，K2HPO4·3H201.0

斜面培養基：蛋白胨0.6，NaCl?0.5，酵母膏0.2；pH值7.2～7.4

發酵培養基：酵母膏0.1，葡萄糖2.0，NaCl?0.5，(NH4)2SO40.1，MgSO4·7H2O0.025，KH2PO40.2，K2HPO41.0；pH值7.2

將適量含油污水或土樣接種于富集培養基中，置于45℃、100～120r/min的搖床培養7～10d，然后每天取樣涂原油平板，分離菌種，按《簡明第八版伯杰氏細菌鑒定手冊》進行菌種鑒定。