[發明專利]用于檢測冠心病易感性的試劑盒

無效

• 申請號: 200610030382.8
• 申請日: 2006-08-25
• 公開（公告）號: CN101131358A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發明（設計）人: 馮哲民;鄒祖燁;樓屹
• 申請（專利權）人: 上海主健生物工程有限公司
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;C12Q1/68
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種用于檢測疾病易感性的試劑盒，尤其是一種檢測冠心病易感性的試劑盒，通過檢測對氧磷酯酶1基因(paraoxonase?1，PON1)的單核苷酸多態性位點來預測個體對冠心病的易感性。

背景技術

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病(coronary?atherosclerotic?heart?disease)指冠狀動脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或(和)因冠狀動脈功能性改變(痙攣)導致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病，統稱冠狀動脈性心臟病(coronary?heart?disease)，簡稱冠心病(CHD)，亦稱缺血性心臟病(ischemic?heartdisease)。

冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是動脈粥樣硬化導致器官病變的最常見類型，也是嚴重危害人民健康的常見病。本病多發生在40歲以后，男性多于女性。發達國家常見，美國約有700萬人患本病，每年約50余萬人死于本病，占人口死亡數的1/3～1/2，占心臟病死亡數的50％～75％。在我國，近年來呈增長趨勢。20世紀70年代北京、上海、廣州本病的人口死亡率分別為21.7/10萬人口、15.7/10萬人口和4.1/10萬人口；90年代我國城市男性本病死亡率為49.2/10萬人口，女性為32.2/10萬人口。

冠心病的發病隨年齡的增長而增高，程度也隨年齡的增長而加重。有資料表明，自40歲開始，每增加10歲，冠心病的患病率增1倍。男性50歲，女性60歲以后，冠狀動脈硬化發展比較迅速，同樣心肌梗塞的危險也隨著年齡的增長而增長。年輕的男性患者比年輕的女性患者多，但絕經后的女性以及年過六十的婦女，其危險就幾乎與男性相等了，甚至大于男性。老年人心臟病發作的可能性較高。

其發病機理是復雜的，綜合性的較長過程。可歸納為四個步驟：1.心血管內皮細胞損害，平滑肌細胞增生。2.血小板粘附于受損的血管壁后，釋放出血清素，血栓素A2、血小板IV、VIII因子等。3.低密度脂蛋白由受損的內皮細胞滲入內膜下的平滑肌細胞，并被吞噬，進入細胞后被細胞內溶酶體的水解酶分解而釋放出游離膽固醇，后者與亞油酸結合，成為重要發病環節。4.在上述病理變化基礎上，最終發生冠狀動脈纖維化、鈣化。

冠心病是一種有遺傳因素和環境因素相互作用而發病的多基因病，尋找冠心病相關基因進而闡明冠心病發病的遺傳機制已經成為目前研究的熱點。

PON1為paraoxonase?1(對氧磷脂酶1)編碼基因，血清中的對氧磷脂酶1可以作為抗氧化劑，對低密度脂蛋白LPL等生物大分子進行水解并降低氧化水平。從而降低血管內的氧化勢，起到對血管的保護作用。基因發生缺陷后，導致對低密度脂蛋白LPL等生物大分子進行水解并降低氧化水平下降，造成對血管壁的損傷，帶來心腦血管的疾病。

SNP(single?nucleotide?polymorphism)，即單核苷酸多態性標記，是一類基于單堿基變異引起的DNA多態性，被遺傳學界稱為第三代遺傳標記。主要是指由基因組核苷酸水平上的變異引起的DNA序列多態性，包括單堿基轉換、顛換，以及單堿基的插入/缺失等。它是基因組中最為廣泛存在的一類多態性標記，占大約90％。這些基因組序列變異可以導致個體間表型的差異以及不同個體對疾病，特別是復雜疾病的易感性、和對環境因素、藥物反應的差異。研究表明，PON1基因上的rs662號SNP位點(SEQ?ID?NO：1所示序列中146位)的多態性(A/G)會引起基因編碼蛋白的第192個氨基酸由Gln變為Arg，而冠心病患者帶有Arg的頻率明顯高于正常人群，PON1基因的Gln192Ar8多態性與冠心病嚴重性、冠狀動脈粥樣硬化進展程度、血脂水平和降血脂藥物治療效果相關。國內外的大量的關聯分析表明，PON1基因的Gln多態(SNP位點基因型為A)能夠降低冠心病的易感性、延緩冠狀動脈粥樣硬化進展程度。該SNPs位點的多態性可用于評估個體對冠心病的易感性，目前已通過中國科學院國家生物基因檢測技術應用評估認證中心的認證。

發明內容

基于PON1基因上的rs662號SNP位點可用來評估個體對冠心病的易感性的基礎上，本發明提供一種用于檢測冠心病易感性的試劑盒。

該試劑盒包括：檢測PON1基因SEQ?ID?NO：1中第146位SNP的特異性引物對及特異性熒光探針、Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、熒光定量PCR反應緩沖液、去離子水。