[發(fā)明專利]BRSK2在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200610030258.1
• 申請(qǐng)日: 2006-08-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101130090A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-02-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 余龍;湯文文;郭澤坤;袁健;唐麗莎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K38/17;A61K39/395;A61P3/10
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 姚靜芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種神經(jīng)元分化相關(guān)基因，即BRSK2，的新用途。

背景技術(shù)

BRSK2(Brain?Selective?Kinase?2)蛋白激酶在2002年由Manning等人根據(jù)激酶結(jié)構(gòu)域氨基酸的保守性歸類到AMPK(AMP-activated?Protein?Kinase)激酶亞家族。這個(gè)亞家族共有14個(gè)成員，包括：AMPKα1，AMPKα2，BRSK1/SAD-A，BRSK2/SAD-B，MARK1，MARK2，MARK3/Par-1A/C-TAK1，MARK4，NUAK1/ARK5，NUAK2/SNARK，QIK，QSK，SIK和MELK。

在這些種內(nèi)同源激酶中，AMPK被認(rèn)為是一個(gè)監(jiān)控細(xì)胞能量狀態(tài)的探測(cè)器。ATP的耗竭以及AMP濃度的上升，或者更準(zhǔn)確的說(shuō)是AMP∶ATP比率的上升可導(dǎo)致AMPK的激活。AMPK激活后將關(guān)閉消耗ATP的合成代謝途徑并激活A(yù)TP合成的分解代謝途徑，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞代謝水平。除了AMPK以外，這個(gè)亞家族的其它成員的功能最近幾年才開(kāi)始有比較多的研究。

BRSK2是AMPK激酶亞家族成員，對(duì)于該蛋白激酶的研究已有的報(bào)道主要著重于BRSK2在腦中與神經(jīng)元極化相關(guān)的研究。小鼠中同源基因的敲除使得小鼠顯示出很少的自主運(yùn)動(dòng)，對(duì)外界刺激反應(yīng)減弱，出生后兩小時(shí)死亡。熒光染料染色顯示突變小鼠的神經(jīng)元軸突和樹(shù)突難以分辨。體外培養(yǎng)的突變小鼠的大腦皮層和海馬神經(jīng)元不能形成明顯的軸突和樹(shù)突。最近的研究更是表明，BRSK2參與了神經(jīng)遞質(zhì)釋放的調(diào)節(jié)。

然而，到目前為止，尚未有人報(bào)道BRSK2對(duì)腦和神經(jīng)以外器官或者組織的作用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種神經(jīng)元分化相關(guān)基因，即BRSK2，的新用途，即其在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了神經(jīng)元分化相關(guān)基因BRSK2(NCBI中核苷酸的序列號(hào)為AF533880，核苷酸的序列號(hào)為AAP97727)在制備抗糖尿病藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明的人BRSK2可以作為篩選和制備抗糖尿病藥物的藥靶。從而為尋找有效的抗糖尿病藥物提供一種新的方法和途徑。

本發(fā)明對(duì)于該基因的研究發(fā)現(xiàn)，BRSK2在胰腺中有很高的表達(dá)量，甚至超過(guò)在腦中的表達(dá)量。進(jìn)一步的免疫組化結(jié)果顯示，BRSK2主要在胰腺的胰島中高表達(dá)。將BRSK2在小鼠的胰島β細(xì)胞(NIT)中過(guò)量表達(dá)，放射性免疫學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中胰島素的含量，結(jié)果顯示，胰島素分泌減少；另一方面用siRNA的方法干擾小鼠的胰島β細(xì)胞(NIT)中內(nèi)源BRSK2，同樣的放射性免疫學(xué)方法檢測(cè)結(jié)果顯示，細(xì)胞培養(yǎng)上清中胰島素的含量增加。由此認(rèn)為，BRSK2可能與糖尿病的發(fā)生相關(guān)，并且可能是糖尿病治療的靶標(biāo)。一方面，通過(guò)檢測(cè)BRSK2表達(dá)量及活性的變化可以預(yù)見(jiàn)胰島素分泌量的變化，即BRSK2活力越高，胰島素分泌量越低；BRSK2活力越低，胰島素分泌量越高。另一方面，以BRSK2為靶標(biāo)，篩選抑制BRSK2活力的物質(zhì)或者方法，可以用于增加胰島素分泌量，從而達(dá)到治療或者緩解以胰島素分泌量下降為癥狀的糖尿病。

本發(fā)明的一種試劑盒中，包括神經(jīng)元分化相關(guān)基因BRSK2蛋白。該試劑盒還可含有檢測(cè)蛋白活力所需的其他試劑，例如緩沖液、分子量標(biāo)記等及使用說(shuō)明。該試劑盒中還可以包含檢測(cè)蛋白活性所用的底物等試劑。

本發(fā)明的BRSK2蛋白可以采用各種常規(guī)的制備方法制備。如基因工程方法或者人工合成方法等。例如，可將BRSK2基因表達(dá)為蛋白而得。

本發(fā)明的BRSK2基因可以采用各種常規(guī)的制備方法制備。本發(fā)明的BRSK2基因序列通常可以用PCR擴(kuò)增法、重組法或人工合成的方法獲得。對(duì)于PCR擴(kuò)增法，可根據(jù)本發(fā)明的BRSK2核苷酸序列，尤其是開(kāi)放閱讀框序列來(lái)設(shè)計(jì)引物，并用市售的cDNA庫(kù)或按本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的常規(guī)方法所制備的cDNA庫(kù)作為模板，擴(kuò)增而得有關(guān)序列。