[發明專利]核苷酸分子SR3B2及其在制備抗糖尿病藥物中的應用

無效

• 申請號: 200610030257.7
• 申請日: 2006-08-22
• 公開（公告）號: CN101130771A
• 公開（公告）日: 2008-02-27
• 發明（設計）人: 余龍;湯文文;郭澤坤;袁健;唐麗莎
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C07H21/02;C12N15/63;A61K48/00;A61P3/10
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司
• 代理人: 姚靜芳

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及一種核苷酸分子及其在制備抗糖尿病藥物中的應用。

背景技術

糖尿病(diabetes?mellitus)是一組由遺傳和環境因素相互作用而引起的臨床綜合征。因胰島素分泌絕對或相對不足以及靶組織細胞對胰島素敏感性降低，引起糖、蛋白、脂肪、水和電解質等一系列代謝紊亂。臨床以高血糖為主要標志，久病可引起多個系統損害。病情嚴懲或應激時可發生急性代謝紊亂如酮癥酸中毒等。

糖尿病主要臨床類型胰島素依賴型糖尿病(IDDM，I型)可發生在任何年齡，但多發生于青幼年。臨床特點是起病急，多食、多尿、多飲、體重減輕等癥狀較明顯，有發生酮癥酸中毒的傾向，必須依賴胰島素治療維持生命。起病初期血中胰島細胞自身抗體陽性率高。口服葡萄糖胰島釋放試驗可見基礎胰島素水平低于正常，葡萄糖刺激后胰島素分泌曲線低平，顯示胰島素缺乏。

非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM，II型)也可發生在任何年齡，但多見于40歲以后中、老年。大多數病人起病緩慢，臨床癥狀相對較輕或缺如。無酮癥酸中毒傾向，但在一定誘因作用下，也可發生酮癥酸中毒或高滲性昏迷。依賴胰島素，但在飲食和口服降糖藥治療效果欠佳時，或因并發癥和伴發病的存在，有時亦需要用胰島素控制高血糖。

然而，到目前為止，尚未有人報道用于抗糖尿病的基因藥物。

發明內容

本發明的目的是提供一種用于制備抗糖尿病藥物的核苷酸。

本發明的另一個目的是提供上述核苷酸的應用。

本發明提供了一種分離出的核苷酸分子，它的序列包括：AAAGUCUGCGAUGCGGAUG。稱為SR3B2。

在本發明中，術語“核苷酸分子SR3B2”指具有抑制BRSK2蛋白活性或者增加胰島素分泌量，并且含有與AAAGUCUGCGAUGCGGAUG序列高度同源的核苷酸序列。該術語還包括與AAAGUCUGCGAUGCGGAUG的同源性至少70％，較佳地至少80％，更佳地至少90％的核苷酸序列。

該術語還包括AAAGUCUGCGAUGCGGAUG的核苷酸序列變異形式。這些變異形式包括(但并不限于)：若干個(通常為1-15個，較佳地1-10個，更佳地1-5個)核苷酸的缺失、插入和/或取代，以及在5’和/或3’端添加數個(通常為10個以內，較佳地為5個以內)核苷酸。例如，在AAAGUCUGCGAUGCGGAUG前(5‘端)加入若干dT后形成的序列。

本發明中的一個實施例中，所用的核苷酸分子序列包括：dTdTAAAGUCUGCGAUGCGGAUG。

本發明還提供了一種載體，它含有上述的核苷酸分子SR3B2。

在本發明中，可選用本領域已知的各種載體，如市售的載體。比如，選用市售的載體，然后將含有本發明SR3B2核苷酸序列的dTdTAAAGUCUGCGAUGCGGAUG可操作地連于表達調控序列，可以形成重組載體。

如本文所用，“可操作地連于”指這樣一種狀況，即線性DNA序列的某些部分能夠影響同一線性DNA序列其他部分的活性。例如，如果信號肽DNA作為前體表達并參與多肽的分泌，那么信號肽(分泌前導序列)DNA就是可操作地連于多肽DNA；如果啟動子控制序列的轉錄，那么它是可操作地連于編碼序列；如果核糖體結合位點被置于能使其翻譯的位置時，那么它是可操作地連于編碼序列。一般，“可操作地連于”意味著相鄰近，而對于本發明的核酸分子則意味著相鄰且不影響功能。

本發明還提供了上述載體轉化的宿主細胞。

在本發明中，術語“宿主細胞”包括原核細胞和真核細胞。常用的原核宿主細胞的例子包括大腸桿菌、枯草桿菌等。常用的真核宿主細胞包括酵母細胞，昆蟲細胞、和哺乳動物細胞。較佳地，該宿主細胞是真核細胞，如CHO細胞、COS、NIT細胞等。

另一方面，本發明還提供了上述的核苷酸分子SR3B2的制備方法，即按AAAGUCUGCGAUGCGGAUG的序列，將各核糖核酸分子依次脫水縮合。

本發明的核苷酸分子SR3B2可以采用各種常規的制備方法制備。本發明的核苷酸分子SR3B2序列通常可以用酶解法或人工合成的方法獲得。

本發明還提供了上述的核苷酸分子SR3B2在制備抗糖尿病藥物中的應用。

用siRNA的方法將含有本發明SR3B2核苷酸序列的CAUCCGCAUCGCAGACUUUdTdT和dTdT?AAGUCUGCGAUGCGGAUG轉染入小鼠的胰島β細胞(NIT)中，放射性免疫學方法檢測結果顯示，細胞培養上清中胰島素的含量增加。