[發明專利]大腸桿菌O157:H7抗原快速檢測測試條

無效

• 申請號: 200610017855.0
• 申請日: 2006-05-30
• 公開（公告）號: CN101082059A
• 公開（公告）日: 2007-12-05
• 發明（設計）人: 劉奇;張燕;范永麗;楊偉東;杜錄堂;杜建平
• 申請（專利權）人: 貝瑞特生物技術（鄭州）有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/10
• 分類號: C12Q1/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于醫用診斷用品技術領域，特別涉及一種大腸桿菌O157:H7快速檢測測試條。

背景技術

大腸桿菌O157:H7是腸出血型大腸桿菌的主要血清型，可通過牛肉及其制品、牛奶及其制品、雞肉、蔬菜、水果、飲料、水等傳播，人與人的密切接觸也可傳播。大腸桿菌O157:H7可引起出血性腸炎，感染病人的典型臨床癥狀為血便、腹痛、低熱或不發熱，約有10％的病人發展為溶血性尿毒綜合癥及血栓性血小板減少性紫癜，并且可對被感染病人的腸道、肝、脾、腎、淋巴、腦、呼吸系統和神經系統造成損傷。老人和兒童為高危人群，易發生溶血性尿毒癥，死亡率高達30％以上。世界衛生組織已把大腸桿菌O157:H7出血性腸炎列為新發傳染病。目前，大腸桿菌O157:H7感染已成為一個世界性的衛生問題。

控制大腸桿菌O157:H7感染疫情的發生及蔓延的一個關鍵因素在于快速、準確的從不同標本中檢測出病原菌，從而為綜合性防治O157:H7感染提供可靠的診斷依據。目前對大腸桿菌O157:H7尚無快速檢測的理想方法，國內主要通過病原分離鑒定，但細菌培養需要較長的時間，一般需要24小時以上，甚至是幾天，而且經細菌學證實的病例中陽性率不高等。不利于及時確診并實施相應控制措施。其它的一些輔助診斷方法如凝集試驗、免疫熒光法等普遍存在靈敏度低、特異性差等問題，有些還需要特殊儀器、操作復雜；國外進口試劑價格昂貴。

發明內容

本發明目的在于提供一種能快速、簡便地診斷出大腸桿菌O157:H7抗原的快速檢測測試條。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：大腸桿菌O157:H7抗原快速檢測測試條，包括基材、覆蓋于基材上的纖維膜、覆蓋于基材上部的吸水膜，測試條下部纖維膜上吸附有大腸桿菌O157:H7抗原(包括菌體抗原和鞭毛抗原)單克隆標記抗體，中部纖維膜上自下而上分布有一條包被有抗鼠IgG的質控線、一條包被有與下部纖維膜上吸附標記抗體配對性良好的大腸桿菌O157:H7抗原單克隆抗體的檢測線。

標記抗體吸附于固定在測試條下部的纖維膜與覆膜之間的基質(玻璃纖維或者無紡布)上；所述下部纖維膜為玻璃纖維膜，中部纖維膜為硝酸纖維膜。

標記抗體標記物為膠體金，膠體金抗體濃度為(1.0-3.0)×10^-3mg/cm²，包被抗體濃度為(2.0-8.0)×10^-4mg/cm²

基質上表面覆蓋有覆膜。

基材選用PVC板，吸水膜選用吸水棉漿板，覆膜選用醫用不干膠膜，纖維膜、吸水膜粘附于PVC板上。

本發明產品制備過程為：以PVC板為基材、以膠體金做標記物為例，包括(1)純化單克隆抗體：采用辛酸-硝酸銨法，取一份抗血清和同體積的生理鹽水，加入辛酸后高速離心30分鐘，取上清夜加入2份飽和的辛酸銨溶液，室溫靜置30分鐘，離心取出沉淀加入緩沖液稀釋。(2)制備膠金體：采用檸檬酸還原法，在燒杯中加入1000ml蒸餾水，100℃煮沸約5分鐘，再加入1％氯化金溶液1ml和1％檸檬酸三鈉溶液2ml，強力攪拌至溶液顏色為深紅色，冷至室溫。調PH至8.2。(3)金標記單抗：取100ml調好PH的膠體金溶液，加入一定量標記抗體，攪拌2分鐘后用1％牛血清血蛋白(BSA)終止反應。高速離心50分鐘，取沉淀用PH＝7.4的0.01M?PB稀釋至原體積的10％。(4)金標固化：用基質吸取此懸浮液，凍干備用。(5)包被膜制備：取包被抗體，調至1mg/ml，包被膜、吸水膜、吸水棉漿板按結構示意圖固定粘貼在基材上，覆蓋上覆膜，切割成一定尺寸即可。