[發明專利]蛋白酶抑制劑的神經細胞保護功能及應用

有效

• 申請號: 200610017166.X
• 申請日: 2006-09-11
• 公開（公告）號: CN101143215A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 顏煒群;王冰;賀巾超;楊莉莉;馬杰
• 申請（專利權）人: 吉林圣元科技有限責任公司
• 主分類號: A61K38/57
• 分類號: A61K38/57;A61P9/10;A61P1/16
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

發明領域

本發明涉及Kunitz型蛋白酶抑制劑(KD/APP，商品名Amykunin)，特別是涉及KD/APP的神經細胞保護功能，及其在生產用于預防和治療神經損傷性疾病的藥物中的應用。

發明背景

BPTI作為堿性絲蛋白酶抑制劑，具用廣譜的蛋白酶抑制活性。在臨床上主要用于減少手術后的大出血和炎癥反應。但BPTI是一種異源蛋白，具有免疫原性。大量或長期反復使用會產生過敏反應。所以需要尋找一個人源的、小分子量、具有強抑制活性的BPTI，β淀粉樣蛋白前體(APP)包含一段Kunitz型結構域(Kunitz?domain，KD)，APP基因定位于人第21號染色體長臂近側區(21q21.2)，其中APP蛋白結構中的KD區域由外顯子7編碼，含有57個氨基酸殘基，與Kunitz型蛋白酶抑制劑(KPI)有同源性。KD/APP基因序列編碼的蛋白除了含57個氨基酸的Kunitz型蛋白酶抑制劑結構域外，其N-端又加入了APP₇₅₁第285～288位的四個氨基酸。APP的表達非常廣泛，可存在于幾乎所有的神經元和非神經元組織。但是各種轉錄物的表達方式顯示一定的細胞和組織特異性。含有Kunitz型蛋白酶抑制劑序列的APP₇₅₁和APP₇₇₀主要表達于非神經元組織。經X-Ray衍射分析，氨基酸序列與Kunitz型蛋白酶抑制劑家族的BPTI有43％同源性。除了第39～41位點的氨基酸殘基不同，其主鏈骨架的氨基酸與BPTI幾乎相同。

作為一種由61個氨基酸組成的多肽，KD/APP分子量相對較小且結構穩定。KD/APP對絲氨酸蛋白酶家族有廣泛的抑制作用，可被抑制的蛋白酶包括胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽釋放酶、纖溶酶、彈性蛋白酶和凝血因子VIIa?IXa?Xa?XIa?XIIa等(例如參見美國專利6,613,890)。作為一種絲氨酸蛋白酶抑制劑和活性藥物成分，KD/APP的基本作用在于將病理性升高的蛋白水解酶活性降低到正常水平，緩解與絲氨酸蛋白酶活性升高有關的臨床癥狀，在臨床廣泛用于手術后的止血及術后并發的炎癥反應。由于KD/APP對因子XIa、XIIa抑制作用可以直接抑制外源性的凝血系統。KD/APP的變異體可以抑制多種絲氨酸蛋白酶，通過活性中心及活性中性附近氨基酸的改變可以抑制廣譜的蛋白酶如因子VII、X、彈性蛋白酶，組織蛋白酶G、尿激酶、組織纖溶酶原激活劑、腸激酶等。能預防和治療臨床上與絲氨酸蛋白酶升高相關的疾病。KD/APP也可以抑制Ca²⁺激活的K⁺離子通道的作用。含有KD的APP還具有細胞表面受體樣作用；調節細胞粘附，APP能夠和某些細胞外基質結合而促進神經元的附著。

然而，迄今為止尚未見有關KD/APP對神經細胞的保護功能以及將其用于預防和治療各種原因導致的腦缺血所致神經損傷性疾病的報道。

發明目的

本發明的一個目的是提供KD/APP在生產用于預防和治療神經損傷性疾病的藥物中的應用。

根據本發明的一個優選實施方案，其中所說的KD/APP是以DNA重組技術制備的。

根據本發明的一個優選實施方案，其中所說的KD/APP是人源的。

根據本發明的一個優選實施方案，其中所說的神經損傷性疾病選自腦梗塞、腦缺血、腦動脈硬化性疾病和腦再灌注性損傷。

本發明的另一個目的是提供一種由KD/APP或其類似物以及一種或多種醫藥上可接受的載體或賦形劑組成的藥物組合物，及其在生產用于保護神經細胞、預防和治療神經損傷性疾病的藥物中的應用。

發明內容

本發明涉及Kunitz型蛋白酶抑制劑(KD/APP)，特別是涉及KD/APP的神經細胞保護功能，及其在生產用于預防和治療病理性腦損傷相關疾病的藥物中的應用。本發明進一步涉及由作為基本活性成分的KD/APP及一種或多種醫藥上可接受的載體或賦形劑組成的藥物組合物。

所謂缺血再灌注(I/R)損傷是指機體器官缺血一定時間后再恢復血液灌注，組織損傷反而進行性加重。這種損傷不具有器官特異性，即任何組織器官均可能在缺血后發生再灌注損傷。早期I/R損傷是一個可逆性的損傷，隨著時間的推進和損傷的加重，組織細胞發生不可逆的損傷，即細胞的壞死和凋亡。近年來，隨著溶栓治療的開展，血循環重建后再灌注性腦損傷的相關研究已取得了較大進展，當前研究從細胞、分子水平比較深入地闡明了腦缺血再灌注損傷機制。