[發明專利]組織內帶菌外植體消毒的處理方法

無效

• 申請號: 200610015601.5
• 申請日: 2006-09-06
• 公開（公告）號: CN101138317A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發明（設計）人: 劉艷軍;楊靜慧;楊恩芹
• 申請（專利權）人: 天津農學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術領域

本發明涉及組織培養技術領域，尤其是一種組織內帶菌外植體消毒的處理方法。

背景技術

組織培養是在無菌條件下，把與母樹分離的植物器官(根、莖、葉等)、組織、細胞及原生質體放在人工配制的培養基中，在人工控制的條件下，培養成大量完整的新植株，從母體上截取的用于培養的那部分稱為外植體。組織培養有以下優點：(1)培養條件可以人為控制。組織培養采用的植物材料完全是在人為提供的培養基和小氣候環境條件下進行生長，擺脫了大自然中四季、晝夜的變化以及災害性氣候的不利影響；且條件均一，對植物生長極為有利，便于穩定地進行周期培養生產。(2)生長周期短，繁殖率高。植物組織培養是由于人為控制培養條件，根據不同植物不同部位的不同要求而提供不同的培養條件，因此生長較快；另外，由于植株比較小，往往20～30d為一個周期，所以，雖然植物組織培養需要一定設備及能源消耗，但由于植物材料能按幾何級數繁殖生產，故總體來說成本低廉，且能及時提供規格一致的優質種苗或脫病毒種苗。(3)管理方便，利于工廠化生產和自動化控制。植物組織培養是在一定的場所和環境下，人為提供一定的溫度、光照、濕度、營養、激素等條件，極利于高度集約化和高密度工廠化生產，也利于自動化控制生產，它是未來農業工廠化育苗的發展方向。它與盆栽、田間栽培等相比省去了中耕除草、澆水施肥、防治病蟲等一系列繁雜勞動，可以大大節省人力、物力及田間種植所需要的土地。

在植物組織培養過程中，外植體的消毒處理是組培成功與否的關鍵步驟。一般情況下，植物組織中很少有微生物存在，若取其為外植體時，只對它的表面進行常規的消毒處理后，可直接用于組織培養。但在有些植物材料中其組織內往往存在一些微生物，這些微生物或者是植物所感染的各類病害，或者是與植物以共生或寄生的形式存在。對于這些生存于植物組織內部(在植物組織間隙或植物細胞中)的微生物，如果采用常規的消毒處理，往往不能達到外植體消毒的目的；有些菌類雖然暫時沒有在組培的初期生長起來，但隨著培養時間的加長，植物組織內部的細菌和真菌就會出現，從而使組培無法進行。因此對于這些組織內部帶菌的外植體進行有效的消毒處理，可以使組培得以順利的進行，尤其對于那些無法取到組織內部無菌的外植體和只有少量可取的組織內部帶菌外植體的珍貴植物材料更為重要。因此需要找到一種簡單的對組織內帶菌的外植體進行有效消毒處理的方法，且不影響外植體的生長，使組織培養得以順利進行。

發明內容

本發明是克服現有技術的不足，提供一種工藝簡單，可對組織內帶菌的外植體進行有效消毒的處理方法。

本發明是通過以下技術方案來實現的：

該組織內帶菌外植體消毒的處理方法是

(1).把取作外植體的植物材料剪成小段或小片，用70％左右的酒精浸濕15～45s，取出后再采用含有效氯2.8％的次氯酸鈉水溶液進行消毒10～20min；

(2).用無菌水沖洗3～5次，將外植體邊緣因消毒變色的部分剪下，然后剪成1～3cm的小塊待用；

(3).將經上述處理的外植體小塊分別接種在抗生素培養基上，每個三角瓶中接種8～10塊，其中每塊外植體的邊緣都要與培養基相接觸，接種后即可放入培養室中進行植株培養。

而且，所述的抗生素組成成分及其濃度為：

羧芐青霉素：250～1000mg/L

硫酸鏈霉素：50～200mg/L；

制霉菌素：550～2200mg/L；

而且，所述的抗生素培養基為在MS培養基中附加蔗糖30g、瓊脂粉6.5g、肌醇0.1g，調PH值為6.2，然后分裝在500mL廣口三角瓶中，高溫滅菌20min左右。

而且，所述的抗生素用0.2μm的微孔過濾器進行抽濾滅菌。

而且，所述的接種后植株培養條件為28℃、24h光照、光強2000lx，培養1周后觀察記錄生長狀況，同時進行繼代培養。

本發明的優點和有益效果是：

1.本發明方法操作簡單，可對組織內帶菌的外植體進行有效消毒處理，且不影響外植體的生長，使組織培養得以順利進行。

2.培養基中加入羧芐青霉素和硫酸鏈霉素的抑制細菌的效果非常明顯，且在低濃度(250mg/L+50mg/L)時抑制細菌的效果也能達到100％，因此在不對外植體的生長開始造成了不良的影響的情況下，在培養基中加入低濃度的羧芐青霉素和硫酸鏈霉素，能充分地抑制外植體中的細菌生長。