[發明專利]制備胰島素綴合物的方法

有效

• 申請號: 200580051831.0
• 申請日: 2005-10-13
• 公開（公告）號: CN101291952A
• 公開（公告）日: 2008-10-22
• 發明（設計）人: N·戴夫;P·哈茲拉;A·戈爾;N·羅伊;A·赫德卡;H·伊耶;G·克里施南;H·S·曼朱納思;S·舒爾亞納拉延;G·馬尼卡姆;G·薩克德夫;M·加格
• 申請（專利權）人: 拜奧康有限公司
• 主分類號: C07K14/62
• 分類號: C07K14/62
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;黃可峻

1.制備胰島素綴合物IN-105的方法，包括

i)在巴斯德畢赤氏酵母中克隆和表達由式IP-F代表的合成多肽前體 G-A-V-R-[B-鏈]-R-D-A-D-D-R-[A-鏈]

ii)發酵表達IP-F的巴斯德畢赤氏酵母克隆

iii)分離和純化IP-F；

iv)將該IP-F與低聚物綴合；

v)用蛋白酶處理該IP-F-低聚物綴合物以獲得活性胰島素-低聚物綴合物， 以及

vi)純化該活性胰島素-低聚物綴合物。

2.權利要求1的方法，其中所述前體IP-F通過離子交換層析然后結晶從液 體培養基分離。

3.權利要求2的方法，其中所述結晶是在酚和ZnCl₂中進行的。

4.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述前體IP-F用活化的低聚物處理。

5.權利要求4的方法，其中所述活化的低聚物是C₁₄H₂₃NO₈的琥珀酰胺衍 生物。

6.權利要求1-3中任一項的方法，其中IP-F與活化低聚物的綴合在一種或 多種選自下述的溶劑中進行：硼酸鹽緩沖液、乙腈、DMSO。

7.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述低聚物在IP-F的B鏈的Lys-B²⁹綴合。

8.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述IP-F-低聚物綴合物是 IP-F-CO-CH₂-CH₂-(OCH₂CH₂)₃-OCH₃。

9.權利要求1-3中任一項的方法，其中所述IP-F-低聚物綴合物被進一步進 行結晶。

10.權利要求1的方法，其中該蛋白酶選自胰蛋白酶或羧肽酶B或其混合 物。

11.權利要求1的方法，其中所述活性胰島素-低聚物綴合物用RP-HPLC 和結晶純化。

12.權利要求1的方法，其中所述活性胰島素-低聚物綴合物是胰島素 -CO-CH₂-CH₂-(OCH₂CH₂)₃-OCH₃。