[發明專利]通過OmpF和目的蛋白的共表達的目的蛋白細胞外生產方法

有效

• 申請號: 200580051085.5
• 申請日: 2005-07-15
• 公開（公告）號: CN101223275A
• 公開（公告）日: 2008-07-16
• 發明（設計）人: 李相燁;崔鐘鉉
• 申請（專利權）人: 韓國科學技術院
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司
• 代理人: 樓高潮

1.一種重組微生物與含OmpF編碼基因的重組載體和含目的編碼基因的重組載體的共轉化并且能夠向微生物外周胞質中表達和分泌目的蛋白，該重組微生物，其特征在于，能夠共表達該OmpF編碼基因和目的蛋白編碼基因從而向微生物細胞的外部(進入培養基中)分泌和生產該目的蛋白。

2.一種通過誘導含目的蛋白編碼基因的重組載體獲得的微生物并能夠向微生物的外周胞質中表達和分泌目的蛋白，進入具有OmpF編碼基因的重組微生物中和其啟動子引入到其染色體中從而表達OmpF編碼基因，該重組微生物，其特征在于，能夠共表達該OmpF編碼基因和目的蛋白編碼基因以向微生物細胞的外部(進入培養基中)分泌和生產該目的蛋白。

3.根據權利要求1所述的重組微生物，其特征在于，含有OmpF編碼基因的重組載體和含有目的蛋白編碼基因的重組載體具有在同樣條件下可表達的起點。

4.根據權利要求1所述的重組微生物，其特征在于，含OmpF編碼基因的重組載體的起點是p15A，并且含目的蛋白編碼基因的重組載體的起點是ColE1。

5.根據權利要求1所述的重組微生物，其特征在于，含OmpF編碼基因的重組載體本身具有OmpF啟動子。

6.根據權利要求1所述的重組微生物，其特征在于，含OmpF編碼基因的重組載體是pACYC-OmpF。

7.根據權利要求1或2所述的重組微生物，其特征在于，OmpF編碼基因來源于E.coli。

8.根據權利要求1或2所述的重組微生物，其特征在于，重組微生物是E.coli。

9.一種獲得目的蛋白的細胞外生產的方法，其特征在于，該方法包括的步驟是：

(a)根據權利要求1至6中任一項所述的重組微生物，向微生物細胞的外部(進入培養基)分泌目的蛋白；和

(b)從培養基中回收目的蛋白。

10.根據權利要求9所述的目的蛋白在細胞外生產的方法，其特征在于，步驟(a)中的目的蛋白的細胞外分泌并不伴隨著微生物進行裂解。

11.一種重組載體通過將OmpF編碼基因引入含目的蛋白編碼基因載體構成，并能夠向微生物的外周胞質中表達和分泌目的蛋白，該重組載體，其特征在于，能夠共表達含OmpF編碼基因和目的蛋白編碼基因從而向微生物細胞的外部(進入培養基中)分泌目的蛋白。

12.根據權利要求11所述的重組載體，其特征在于，該含OmpF編碼基因來源于E.coli.

13.一種根據權利要求11所述的重組載體轉化而來的微生物。

14.根據權利要求13所述的轉化微生物，其特征在于，的微生物是E.coli.

15.一種目的蛋白的細胞外生產的方法，其特征在于，該方法包括的步驟是：

(a)培養根據權利要求13或14的轉化微生物，向微生物細胞的外部(進入培養基)分泌目的蛋白；和

(b)從培養基中回收目的蛋白。

16.根據權利要求15所述的目的蛋白的細胞外生產的方法，其特征在于，步驟(a)中的目的蛋白的細胞外分泌并不伴隨著微生物進行裂解。