[發(fā)明專利]PH梯度離子交換LC－MS和與質(zhì)譜相容的緩沖液

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200580050116.5
• 申請(qǐng)日: 2005-12-06
• 公開（公告）號(hào): CN101198862A
• 公開（公告）日: 2008-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 謝佳輝;曾嶸
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 謝佳輝;曾嶸
• 主分類號(hào): G01N30/00
• 分類號(hào): G01N30/00;G01N30/02;C02F1/28
• 代理公司: 北京北翔知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 鐘守期;唐鐵軍

相關(guān)申請(qǐng)的相互參引

本申請(qǐng)要求2005年4月20日提交的臨時(shí)申請(qǐng)No.60/673,176的優(yōu)先權(quán)，為此將該臨時(shí)申請(qǐng)全部納入本說明書。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(LC-MS)。本發(fā)明尤其涉及用于pH梯度離子交換LC-MS的體系和使用所述體系的方法。本發(fā)明也涉及與質(zhì)譜相容的緩沖體系及使用所述緩沖體系的方法。

背景技術(shù)

在一個(gè)液相色譜體系中或一個(gè)全溶液液相色譜體系中，液相色譜(LC)柱位于進(jìn)樣器和檢測(cè)器之間，用以將待分析的樣品中一種或多種感興趣的組分與多種干擾組分分離并通過檢測(cè)器對(duì)這些組分進(jìn)行檢測(cè)。液相色譜體系中的典型的質(zhì)譜檢測(cè)器可以測(cè)量并輸出樣品中組分的單位體積的質(zhì)譜或單位時(shí)間的質(zhì)譜。從這類輸出信號(hào)，可提供一種“色譜圖”。然后操作員可用該色譜圖準(zhǔn)確鑒定并定量樣品中存在的化學(xué)組分。

色譜法的趨勢(shì)一直是向更高性能和小型化液相色譜柱的方向發(fā)展。近期朝小型化發(fā)展的勢(shì)頭強(qiáng)勁的原因在于，小型的液相色譜柱具有極低的溶劑消耗量并且對(duì)分析樣品的體積的需求急劇降低，從而可在樣品量有限時(shí)提供高效、靈敏的分離。

在液相色譜中，使用微粒填充的狹窄直徑柱可以獲得高分離度。小型的微粒填充的液相色譜柱一般通過用分離介質(zhì)、例如鍵合的二氧化硅微粒均勻填充狹窄直徑的管而制得，分離介質(zhì)也被稱為填料或固定相。

常規(guī)用于制備小型分析柱的物質(zhì)包括聚合物、玻璃、金屬、熔融二氧化硅及其子類中涂有聚合物的熔融二氧化硅和包覆聚合物的熔融二氧化硅。代表性的金屬典型地包括不銹鋼和玻璃襯里不銹鋼。

小型液相色譜柱包括小口徑柱、微徑柱及毛細(xì)管柱。這些柱子的長度一般為約5mm-300mm，但在某些情況下可接近最高達(dá)5000mm的長度。小口徑柱通常具有約2mm的內(nèi)徑，而微徑柱具有近似1mm的直徑。熔融二氧化硅及其它毛細(xì)管柱一般具有小于1mm、通常小于0.1mm的內(nèi)徑。實(shí)際上，具有0.075mm內(nèi)徑的毛細(xì)管柱幾乎已成為液相色譜質(zhì)譜連用儀的標(biāo)準(zhǔn)配備。熔融二氧化硅毛細(xì)管柱可承受高填充壓力，例如9000psi或更大。

用反相填料填充的二氧化硅毛細(xì)管已用在蛋白質(zhì)組學(xué)領(lǐng)域中，用于通過HPLC-MS/MS分析蛋白質(zhì)/肽。該方法使用與質(zhì)譜檢測(cè)器連用的高效液相色譜(HPLC)體系。成千上萬的蛋白質(zhì)/肽通過HPLC分離，然后用串聯(lián)的質(zhì)譜表征。肽序列的鑒定通過將質(zhì)譜/質(zhì)譜(MS/MS)譜圖與理論譜圖比較來進(jìn)行。蛋白質(zhì)通過將肽序列與來自染色體組或蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫的預(yù)測(cè)片斷相比較進(jìn)行鑒定。

離子交換HPLC廣泛用在蛋白質(zhì)/肽的分離中。其對(duì)生物聚合物的分離提供高分辨率而不使蛋白質(zhì)/肽變性。但是，離子交換HPLC需要使用鹽梯度以從固定相中洗脫樣品。鹽導(dǎo)致高霧流并干擾質(zhì)譜信號(hào)。因此所有的離子交換HPLC在實(shí)施質(zhì)譜分析前需要大量的樣品清洗工作以除去鹽。這種做法耗時(shí)。此外，一些樣品會(huì)在清洗步驟中損失。

很明顯，對(duì)用于分離和分析生物樣品和藥物樣品的離子交換LC-MS的新方法和新體系具有迫切需要。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明涉及pH梯度離子交換LC-MS體系，該體系包括：

一個(gè)進(jìn)樣器；

一個(gè)或多個(gè)HPLC泵；

一個(gè)或多個(gè)LC柱，該柱獨(dú)立地選自離子交換柱、整體柱和一個(gè)或多個(gè)離子交換柱與一個(gè)或多個(gè)適于多維LC-MS的LC柱的組合柱，并且其中所述一個(gè)或多個(gè)LC柱中至少一個(gè)用于pH梯度LC-MS；

一個(gè)緩沖體系，該體系含有一種緩沖酸或堿或其結(jié)合物，其中所述緩沖酸或堿在pH約2到約10的范圍內(nèi)具有緩沖能力；并且其中所述緩沖酸或堿與質(zhì)譜儀相容；和

一個(gè)質(zhì)譜儀。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多維LC-MS是二維LC-MS。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述質(zhì)譜儀包括一個(gè)電噴霧離子化(ESI)接口或一個(gè)基質(zhì)輔助激光解吸電離(MALDI)接口。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)LC柱包括一個(gè)離子交換柱。

在另一實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)LC柱包括一個(gè)整體柱。

在再一實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)LC柱包括一個(gè)或多個(gè)離子交換柱與一個(gè)或多個(gè)適于二維LC-MS的LC柱的組合柱。

在又一實(shí)施方案中，所述pH梯度是一個(gè)連續(xù)的pH梯度。

本發(fā)明也涉及用于pH梯度LC-MS的緩沖體系。該緩沖體系含有一種緩沖酸或堿或其結(jié)合物，其中所述緩沖酸或堿在pH約2到約10范圍內(nèi)具有緩沖能力；并且其中所述緩沖酸或堿與質(zhì)譜儀相容。