[發(fā)明專利]包含VDUP1蛋白或其編碼基因的用于將造血干細(xì)胞分化為天然殺傷細(xì)胞的試劑，及利用該試劑將造血干細(xì)胞分化為天然殺傷細(xì)胞的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580050003.5
• 申請日: 2005-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN101198690A
• 公開（公告）日: 2008-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔仁杓;尹錫蘭;李基寧;金善昱;柳大烈
• 申請（專利權(quán)）人: 韓國生命工學(xué)研究院
• 主分類號(hào): C12N5/00
• 分類號(hào): C12N5/00;C12N5/08
• 代理公司: 中科專利商標(biāo)代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 王旭

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及將造血干細(xì)胞分化為天然殺傷細(xì)胞的試劑，及利用該試劑將造血干細(xì)胞分化為天然殺傷細(xì)胞的方法，更明確地涉及，將造血干細(xì)胞分化為天然殺傷細(xì)胞的試劑，所述試劑含有作為有效成分的VDUP1(上調(diào)蛋白1的維生素D3)或其編碼基因或調(diào)節(jié)VDUP1的維生素D3，以及利用該試劑將HSCs分化為NK細(xì)胞的方法。

背景技術(shù)

造血干細(xì)胞，即干細(xì)胞中的一種，能夠通過任何機(jī)會(huì)分化為各種血液成分(紅細(xì)胞(red?blood?cell或erythrocyte)，白細(xì)胞(white?bloodcell或leukocyte)，血小板和淋巴細(xì)胞)，且在體內(nèi)不斷地自體再生并分化為免疫細(xì)胞。在形成免疫系統(tǒng)的細(xì)胞中，天然殺傷細(xì)胞(下文中稱為“NK細(xì)胞”)能夠殺傷非特異性腫瘤細(xì)胞。NK細(xì)胞的細(xì)胞毒性不僅提供利用淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)和腫瘤滲透淋巴細(xì)胞(TIL)處理實(shí)體腫瘤的線索，還適用于通過供體淋巴細(xì)胞輸注進(jìn)行的免疫療法(J.Immunol.，36：3910-3915，1986；Hematologia，84：1110-1149，1999)，從而開發(fā)一種新型的對付骨髓移植或器官移植后排斥反應(yīng)的細(xì)胞療法。根據(jù)近期的報(bào)告，NK細(xì)胞有缺陷的分化和活化在多種疾病中有所涉及，所述疾病包括乳腺癌(Breast?Cancer?Res.Treat.，66：255-263，2003)，黑素瘤(MelanomaRes.，13：349-356，2003)，肺癌(Lung?Cancer，35：23-18，2002)，等，并且因此，產(chǎn)生了利用NK細(xì)胞治療這些疾病的新型細(xì)胞療法。

NK細(xì)胞來源于骨髓中的造血干細(xì)胞。NK細(xì)胞由HSCs的發(fā)育由若干步驟組成，尚未完全定義這些步驟。

上調(diào)蛋白1的維生素D3(VDUP1)最初報(bào)告是通過HL-60白血病細(xì)胞中的維生素D3進(jìn)行上調(diào)的(Biochem.Biophys.Acta，1219：26-32，1994)。近期還有報(bào)告指出VDUP1與硫氧還蛋白(Trx)相互作用，從而抑制Trx的活性并阻斷Trx與其它因子的相互作用(J.Biol.Chem.，274：21645-21650，1999，J.Immunol.，164：6287-6295，2000)。換句話說，VDUP1在Trx調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)氧化/還原中充當(dāng)負(fù)控制劑，從而使該細(xì)胞對氧化應(yīng)力更加敏感。另外，報(bào)道指出VDUP1反義DNA在鼠黑素瘤細(xì)胞中的黑色素合成和腫瘤發(fā)生中有所涉及(Immunology?Letters，86：235-247，2003)，且通過抑制腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期而具有抗癌活性。實(shí)際上，VDUP1在腫瘤組織中的表達(dá)與在正常細(xì)胞中的表達(dá)相比有所下降。VDUP1的表達(dá)在免疫細(xì)胞中是顯性的，但是其在免疫細(xì)胞中全部的作用尚未知。

因此，本發(fā)明人證實(shí)了VDUP1通過調(diào)節(jié)VDUP1基因敲除小鼠中IL-2受體β(CD122)而參與NK細(xì)胞體外分化，，還證實(shí)了上調(diào)VDUP1的維生素D3也調(diào)節(jié)NK細(xì)胞的分化。并且，本發(fā)明人通過證實(shí)利用基因調(diào)節(jié)分化為NK細(xì)胞的可能性完成了本發(fā)明，其中所述NK細(xì)胞具有細(xì)胞毒性和控制免疫系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞分化及進(jìn)一步進(jìn)行癌癥治療的能力。

發(fā)明內(nèi)容

技術(shù)問題

本發(fā)明證實(shí)VDUP1(上調(diào)蛋白1的維生素D3)即調(diào)節(jié)干細(xì)胞分化為NK細(xì)胞的基因，的功能，并且因此提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，所述試劑含有VDUP1或編碼該蛋白質(zhì)的基因和調(diào)節(jié)VDUP1基因的維生素D3，以及利用該試劑的分化方法。

技術(shù)方案

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，該試劑含有作為有效成分的VDUP1蛋白或其編碼基因。

本發(fā)明還提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，特征在于含有由SEQ?ID?NO：1所代表的VDUP1蛋白。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，特征在于含有由SEQ?ID?NO：2所代表的VDUP1基因。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，特征在于通過向非病毒載體或病毒載體中引入所述基因制備而成。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，其中所述非病毒載體是在圖18中存在的pFLAGmVDUP1。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，其包括作為有效成分的維生素D3。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，其特征為通過維生素D3調(diào)節(jié)VDUP1基因。

本發(fā)明提供用于NK細(xì)胞分化的試劑，特征在于可用于癌癥的治療。