[發明專利]利用sHSPs制備目的蛋白的方法無效
| 申請號： | 200580049905.7 | 申請日： | 2005-05-23 |
| 公開（公告）號： | CN101180308A | 公開（公告）日： | 2008-05-14 |
| 發明（設計）人： | 李相燁;韓美正 | 申請（專利權）人： | 韓國科學技術院 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 | 代理人： | 樓高潮 |
| 地址： | 韓國大*** | 國省代碼： | 韓國;KR |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 利用 shsps 制備 目的 蛋白 方法 | ||
技術領域
本發明涉及一種目的蛋白的分離和純化方法、目的蛋白的制備方法、以及通過全細胞酶或部分純化酶來進行生物轉化的方法，其中添加了有效量的sHSPs(小熱休克蛋白)以防止蛋白酶降解目的蛋白。
背景技術
由于重組DNA技術的顯著發展，使得通過E.coli、酵母、真菌、植物、動物以及昆蟲細胞大量生產可供于醫用和工業用上的蛋白成為可能，而從自然界中僅能少量地獲取這些蛋白。例如，已經成功的利用重組E.coli生產諸如干擾素、白介素2、集落刺激因子、生長激素、胰島素樣生長因子以及人血清白蛋白等蛋白質(Lee.SY，Trends?Biotechnol.，14：98，1996)。特別地，很好地建立了E.coli的高密度細胞培養技術，其中可以以較高的產率大規模地生產目的蛋白，從而降低目的蛋白生產的成本。然而，即便可以通過有效的載體表達系統來大量生產有用蛋白，如果沒有建立較好的蛋白分離和純化系統，蛋白的最終產率會迅速降低。在蛋白合成較為困難、費時費力或者蛋白本身產量較小的情況下，該分離和純化步驟就顯得尤為重要。
蛋白的分離和純化通常包括如下步驟：(1)細胞抽提：用玻璃勻漿器、混合器、polytron和超聲儀等儀器來破壞細胞或組織，隨后通過離心方法分離；(2)溶解：當要分離和純化不溶性蛋白時，首先，需要將蛋白溶解。采用不同性質的表面活性劑(SDS、曲拉通X-100、諾乃洗滌劑P-40、CHAPS等)作為溶解生物細胞膜蛋白的試劑；(3)蛋白的分離、濃縮和透析：在純化蛋白樣品之前采用基于蛋白溶解性的硫酸銨沉淀法，基于蛋白分子量不同的分子量截留法，基于多孔纖維素膜的透析法等方法；以及(4)蛋白的最終純化：因為純化蛋白的方法如下表1那樣是多種多樣的，那么就需要根據實驗的目的和材料類型對各種方法進行組合從而實現純化。一般來說，在初始步驟中，需要具有大量處理能力的方法，即便其分離能力在某種程度而言是較低的，而隨著最后步驟的臨近則需采用具有高分離能力的方法。
表1：純化蛋白的典型方法
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