[發明專利]制備可溶性多跨膜蛋白的方法

無效

• 申請號: 200580048588.7
• 申請日: 2005-12-22
• 公開（公告）號: CN101128586A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 詹姆斯·A·厄恩斯特;丹尼爾·G·揚蘇拉;金胡善
• 申請（專利權）人: 健泰科生物技術公司
• 主分類號: C12N15/70
• 分類號: C12N15/70;C07K14/705;C07K16/18;G01N33/53;G01N33/68
• 代理公司: 北京市柳沈律師事務所
• 代理人: 封新琴

1.一種表達構建體，用于單或多跨膜多肽在宿主細胞中增強的表達，包含以下可操作連接的元件：

a.編碼單或多跨膜多肽的多核苷酸；

b.在宿主細胞中有效的并具有低基礎活性的嚴密調控的啟動子；

c.增強對啟動子的調控的至少一個正調節調控元件和至少一個負調節調控元件；

d.包含翻譯起始增強子的前導序列。

2.權利要求1的表達構建體，其中所述前導序列進一步包含翻譯延伸間隔區序列。

3.權利要求1的表達構建體，進一步包含一個或多個轉錄終止子，和/或一個或多個親和純化標簽。

4.權利要求1的表達構建體，其中所述宿主細胞是細菌細胞，所述啟動子是phoA、phac或tphac啟動子。

5.權利要求1的表達構建體，其中所述宿主細胞是細菌細胞，所述啟動子是T7、metE或λPL啟動子。

6.權利要求1的表達構建體，其中所述宿主細胞是細菌細胞，所述啟動子是被工程化以含有至少一個異源調控元件來降低基礎活性的β-內酰胺酶、乳糖或色氨酸啟動子。

7.權利要求1的表達構建體，其中所述負調控元件是lac操縱基因、trp操縱基因或λ操縱基因，其中所述正調控元件是pho盒、MalT?DNA結合位點或AraC?DNA結合位點。

8.權利要求1的表達構建體，其中所述轉錄終止子是λ序列：AACGCTCGGTTGCC?GCCGGGCGTT?TTTTATT(SEQ?ID?NO：17)或His操縱子終止子。

9.權利要求1的表達構建體，其中所述翻譯起始序列包含高度表達的多肽的約前6個到約前12個密碼子。

10.權利要求1的表達構建體，其中所述翻譯起始序列包含β-半乳糖苷酶、蛋白A、谷胱甘肽-S-轉移酶的約前6個到約前12個密碼子。

11.權利要求1的表達構建體，其中所述翻譯起始序列包含選自由ATGGGCAGCAGCCATCATCATCATCATCAT(SEQ?ID?NO：34)、ATGAAAGCAATTTTCGTACTGAAAGGTTCA(SEQ?ID?NO：35)和ATG?AAACAC?CAA?CAC?CAA?CAA(SEQ?ID?NO：28)構成的組的核苷酸序列。

12.權利要求1的表達構建體，其中所述前導序列進一步包含延伸間隔區序列，所述延伸間隔區序列包含高度表達的細菌基因的超過約50個氨基酸和低于約120個氨基酸的至少一部分。

13.權利要求2的表達構建體，其中所述翻譯延伸間隔區序列編碼已知在宿主細胞中高度表達的基因的至少一部分。

14.權利要求2的表達構建體，用于在細菌細胞中表達，其中所述翻譯延伸間隔區序列包含良好表達的細菌基因的約50到約120個氨基酸。

15.權利要求2的表達構建體，用于在細菌細胞中表達，其中所述翻譯延伸間隔區序列包含trp操縱子的E基因的約50到約120個氨基酸。

16.權利要求2的表達構建體，用于在細菌細胞中表達，其中所述翻譯延伸間隔區序列包含SEQ?ID?NO：29或30的序列。

17.權利要求1的表達構建體，其中所述多肽含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或24個跨膜區域。

18.權利要求1的表達構建體，其中所述多肽是具有四個跨膜區域的MS4A基因家族的成員。

19.權利要求1的表達構建體，其中所述多肽是CD20或C2S-CD20或包含Cys111Ser、Cys220Ser和Cys81Ala突變的突變型CD20。

20.權利要求1的表達構建體，其中所述宿主細胞是大腸桿菌細胞。

21.權利要求1的表達構建體，其中所述多肽是GPR73或RA1c。

22.權利要求1的表達構建體，其中所述宿主細胞是細菌細胞，進一步包含編碼細菌細胞的稀有密碼子的一個或多個tRNA基因。

23.用于在細菌細胞中表達跨膜多肽的表達系統，包含權利要求1的表達構建體。