[發(fā)明專利]畜水產(chǎn)品中殘留動(dòng)物用藥物的提取液

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200580048363.1
• 申請(qǐng)日: 2005-12-16
• 公開（公告）號(hào): CN101124479A
• 公開（公告）日: 2008-02-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 北山雅彥;小園正樹;大森丘;森松文毅;山田良司
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 日本肉類批發(fā)商株式會(huì)社
• 主分類號(hào): G01N33/15
• 分類號(hào): G01N33/15;G01N1/36;G01N33/12
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;李平英

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及殘留動(dòng)物用藥物的提取液。更詳細(xì)地說，涉及測(cè)定畜水產(chǎn)品中殘留的動(dòng)物用藥物時(shí)所使用的提取液。

背景技術(shù)

近年來，為了預(yù)防/治療畜水產(chǎn)動(dòng)物的疾病或促進(jìn)生長，人們使用了許多種動(dòng)物用藥物。測(cè)定畜水產(chǎn)品中動(dòng)物用藥物的殘留量(定量)對(duì)確保食品安全至關(guān)重要?；诖朔N狀況，日本及國外各國導(dǎo)入了與畜水產(chǎn)品中殘留的動(dòng)物用藥物相關(guān)的肯定列表制度，同時(shí)規(guī)定了200多種動(dòng)物用藥物殘留量的暫定基準(zhǔn)值，但實(shí)際上用公定方法對(duì)每種動(dòng)物用藥物的殘留進(jìn)行分析，時(shí)間與勞動(dòng)力均難以應(yīng)付。因此希望開發(fā)出一種能同時(shí)對(duì)多成分且簡(jiǎn)便、迅速分析的殘留物質(zhì)的分析方法。

在動(dòng)物用藥物中，特別是抗菌物質(zhì)(例如抗生素、合成抗菌藥等)在目前集約化飼養(yǎng)方式下使用的種類和用量均有增加的趨勢(shì)，其在畜水產(chǎn)品中殘留的可能性倍受關(guān)注。

但現(xiàn)在的問題是，即使對(duì)在食品衛(wèi)生法中規(guī)定的動(dòng)物用藥物中，諸如螺旋霉素、替米考星、慶大霉素、大觀霉素、新霉素等抗生素類或喹喔啉甲酸、環(huán)丙馬秦等高極性化合物也未能開發(fā)出多成分同步分析的方法。進(jìn)行所述多成分同步分析，需要從被檢物畜水產(chǎn)品中一次性提取出多種殘留動(dòng)物用藥物。對(duì)可溶于有機(jī)溶劑的動(dòng)物用藥物來講，通過使用有機(jī)溶劑作為提取液，上述問題已得到解決(例如，參考Howells，L.，Sauer，M.J.，Analyst，126，155～160，2001)。但是，對(duì)難溶于有機(jī)溶劑的藥物來講，因不能使用有機(jī)溶劑，提取工序存在問題。

如上所述，對(duì)可溶于有機(jī)溶劑的動(dòng)物用藥物來講，使用有機(jī)溶劑作為提取液，問題已得到解決，也期望對(duì)水溶性的動(dòng)物用藥物能同時(shí)提取的一次性提取液。但問題是在動(dòng)物用藥物中，如抗菌物質(zhì)等各種藥物可穩(wěn)定存在的條件各異，要在多種殘留的動(dòng)物用藥物不變性的條件下高效一次性提取是困難的。

為解決上述問題，本發(fā)明人等進(jìn)行了各種研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)通過使用具有特定性質(zhì)的提取液，可以在多種殘留動(dòng)物用藥物不變性的條件下，高效一次性提取。本發(fā)明根據(jù)這一發(fā)現(xiàn)而設(shè)，提供對(duì)畜水產(chǎn)品中殘留的動(dòng)物用藥物、特別是抗菌物質(zhì)一次性提取有用的提取液。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題所做的本發(fā)明是一種畜水產(chǎn)品中殘留動(dòng)物用藥物的提取液，其包括含0.05～1％(W/V，以下同樣)的偏磷酸、pH為5.5～7.5的緩沖液。該提取液特別適合用于殘留動(dòng)物用藥物為抗菌物質(zhì)時(shí)的提取，緩沖液優(yōu)選使用McIlvaine緩沖液。

實(shí)施發(fā)明的最佳方式

如上所述，動(dòng)物用藥物中特別是抗菌物質(zhì)，各種物質(zhì)穩(wěn)定存在的條件不同，導(dǎo)致難以一次性提取?；谏鲜鲇^點(diǎn)，本申請(qǐng)發(fā)明人等為消除這一障礙，進(jìn)行了如下試驗(yàn)。

首先，根據(jù)提取液的極性，將目標(biāo)物質(zhì)分成了兩類。目標(biāo)物質(zhì)之一選擇的是可溶于有機(jī)溶劑的四環(huán)素等21種化合物；目標(biāo)物質(zhì)之二選擇的是高極性且難溶于有機(jī)溶劑的氨基糖苷類抗生素的4種化合物(鏈霉素、雙氫鏈霉素、大觀霉素和慶大霉素)。

首先，進(jìn)行的是添加回收試驗(yàn)，即在牛肉中加入規(guī)定量的目標(biāo)物質(zhì)，以此作為被檢物，對(duì)其利用pH7.0的McIlvaine緩沖液/EDTA/甲醇混合溶劑進(jìn)行提取，再使用C₁₈固相提取柱進(jìn)行純化。

對(duì)目標(biāo)物質(zhì)之一的21種化合物進(jìn)行了20ppb濃度的添加回收試驗(yàn)，結(jié)果回收率以及變動(dòng)系數(shù)基本達(dá)到了法定藥典的基準(zhǔn)。

與此不同，對(duì)目標(biāo)物質(zhì)之二的氨基糖苷類抗生素，為使這些化合物能吸附于C₁₈固相提取柱，提取液中添加了離子對(duì)試劑七氟丁酸，然后通過C₁₈固相提取柱進(jìn)行了純化。通過這樣的操作預(yù)計(jì)回收鏈霉素、雙氫鏈霉素、大觀霉素和慶大霉素，可實(shí)際上未能回收到慶大霉素。

為了查找到原因，在C₁₈固相提取柱處理前，向提取液中添加標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，結(jié)果論及的所有氨基糖苷類抗生素得到回收。因此判斷問題出現(xiàn)在C₁₈固相提取柱純化前的工序，即提取。

在此試驗(yàn)慶大霉素提取法，用公定方法規(guī)定的提取條件即在提取液中使用1％的偏磷酸(pH2)，研究的結(jié)果確認(rèn)可以回收慶大霉素。以往使用上述1％偏磷酸(pH2)目的在于除去蛋白質(zhì)，提取溶劑因添加偏磷酸呈現(xiàn)了酸性。

但是，如果采用此類提取溶劑，則紅霉素等酸性條件下不穩(wěn)定的化合物就會(huì)被分解掉。因此，多種成分同步分析法不能使用低pH的提取液。此外，考慮有氯四環(huán)素等在堿性條件下不穩(wěn)定的化合物存在，因此多種成分同步測(cè)定需要在中性條件下提取。為此，就接近中性條件下的提取方法進(jìn)行了研討。