[發(fā)明專利]液相色譜法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200580048075.6
• 申請(qǐng)日: 2005-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN101119797A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: K·V·安德森;A·伯格;T·普勒斯;J·瓦西
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 通用電氣健康護(hù)理生物科學(xué)股份公司
• 主分類號(hào): B01J20/281
• 分類號(hào): B01J20/281;C07K1/22;B01D15/08
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉鍇;梁謀

1.一種通過連續(xù)液相色譜從粗細(xì)胞溶解產(chǎn)物中無磁提純一種或多種目標(biāo)細(xì)胞成分的方法，所述方法包括

(a)將細(xì)胞溶解在容器中，提供粗細(xì)胞溶解產(chǎn)物；

(b)使由此得到的粗細(xì)胞溶解產(chǎn)物通過填有多孔顆粒色譜基質(zhì)的色譜柱，以吸附所述的目標(biāo)成分，其中所述顆粒的表面存在載有選自Ni²⁺離子、Cu²⁺離子和Zn²⁺離子的一種或多種金屬離子的固定化次氮基三乙酸(NTA)配體；和，任選地，

(c)通過使所述基質(zhì)與釋放吸附組分的洗脫緩沖液接觸，回收所述的目標(biāo)成分。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)的溶解包括化學(xué)溶解。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中(a)的溶解包括機(jī)械溶解。

4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中(a)的溶解包括化學(xué)溶解和之后的機(jī)械溶解。

5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的目標(biāo)成分是蛋白和/或肽。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其中所述的蛋白/肽用至少一個(gè)組氨酸殘基標(biāo)記。

7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述色譜基質(zhì)的結(jié)合容量為至少約30mg蛋白/ml基質(zhì)，優(yōu)選至少約40mg蛋白/ml色譜基質(zhì)。

8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其使用制備規(guī)模的體積和流速進(jìn)行。

9.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的方法，其使用分析規(guī)模的體積和流速進(jìn)行。

10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的NTA配體已經(jīng)通過硫醚連接固定化在所述的多孔顆粒上。

11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述的NTA配體載有Ni²⁺離子。

12.根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法，其中所述顆粒的大小分布為45-165μm。

13.一種提純目標(biāo)細(xì)胞成分的方法，其包括：

(a)使用根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法提純目標(biāo)成分；

(b)沖洗所述色譜基質(zhì)；

(c)使用根據(jù)前述權(quán)利要求中任意一項(xiàng)所述的方法提純目標(biāo)成分；

其中(b)-(c)重復(fù)至多10次。

14.一種提純目標(biāo)細(xì)胞成分的方法，其包括：

(a)使用根據(jù)權(quán)利要求1-12中任意一項(xiàng)所述的方法提純目標(biāo)成分；

(b)溶出所述色譜基質(zhì)上的Ni²⁺離子；

(c)對(duì)所述色譜基質(zhì)進(jìn)行原地清洗(cip)；

(d)將所述色譜基質(zhì)重新載有Ni²⁺離子；和

(e)使用根據(jù)權(quán)利要求1-12中任意一項(xiàng)所述的方法提純目標(biāo)成分；

其中(b)-(e)重復(fù)至多30次。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的方法，其中(b)的溶出之前是沖洗，所述沖洗之后繼續(xù)提純至少一次。