[發明專利]RNAi抑制CTGF用于治療眼科疾病

無效

• 申請號: 200580047923.1
• 申請日: 2005-12-19
• 公開（公告）號: CN101160138A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發明（設計）人: A·R·謝帕德;彭玉豪
• 申請（專利權）人: 愛爾康公司
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00
• 代理公司: 北京市中咨律師事務所
• 代理人: 黃革生;林柏楠

發明領域

本發明涉及可抑制眼科疾病中結締組織生長因子(CTGF)表達的干擾性RNA組合物領域。

發明背景

大多數眼科疾病都與細胞過程有關，這些過程包括細胞增殖、存活、遷移、分化和血管發生。CTGF是這些細胞過程的一種分泌的細胞因子和主要介體。具體地，已知CTGF主要通過增加膠原蛋白I和纖連蛋白的沉積來增加細胞外基質的產生。CTGF的過表達被認為是硬皮病、纖維增生疾病、疤痕形成等疾病的主要病因因素，這些疾病中存在細胞外基質成分的過度積累。

在小梁網(TM)區域的細胞外基質物質的過度積累是很多類型青光眼的標志，這種增加被認為增加了對水性流出物的阻力，從而導致眼內壓升高。于2003年11月13日以WO?03/092584公布并轉讓給Alcon公司的Fieenor等人的國際專利申請號PCT/US2003/012521描述在青光眼TM細胞中CTGF?mRNA較正常TM細胞中有所增加。因此，可以認為CTGF在小梁網細胞的細胞外基質產生中發揮作用。

黃斑變性是負責高精度視覺的中央視網膜部分(被稱作黃斑區)中感光細胞的喪失。黃斑變性與視網膜色素上皮和血管脈絡膜之間膜中細胞外基質成分的異常沉積有關。這種碎屑狀物質被稱作脈絡膜小疣。眼底鏡檢查可以觀察到脈絡膜小疣。正常眼睛的黃斑區沒有脈絡膜小疣，而在視網膜周圍可能富含脈絡膜小疣。如果黃斑視力沒有任何損失而在黃斑區出現軟的脈絡膜小疣，可以認為是AMD的早期。

除了其他一些眼科疾病，脈絡膜新血管形成還經常發生在黃斑變性中，并且與脈絡膜內皮細胞增殖，細胞外基質的過量產生和纖維血管性視網膜下膜的形成有關。視網膜色素上皮細胞的增殖和血管生成因子的產生似乎實現脈絡膜新血管的形成。

糖尿病性視網膜病變是一種糖尿病中發生在由毛細血管基底膜增厚和毛細血管周細胞和內皮細胞之間缺乏接觸引起的的眼科疾病。周細胞的喪失增加了毛細血管的滲漏，導致血-視網膜屏障的破壞。

增殖性玻璃體視網膜病變與玻璃體膜內和視網膜表面的細胞膜和纖維化膜的細胞增殖有關。視網膜色素上皮細胞的增殖和遷移在這種眼科疾病中很常見。與增殖性玻璃體視網膜病變有關的膜包括細胞外基質成分如I型、II型和IV型膠原蛋白，纖粘蛋白，而且這些膜會變得逐漸纖維化。

創傷愈合疾病可以通過激活炎癥細胞、釋放生長因子和細胞因子、眼細胞的增殖和分化、毛細血管通透性的增加、基底膜基質成分的改變、細胞外基質的沉積增加、纖維化、新血管形成和組織重塑，導致嚴重的眼組織損傷。

因此，CTGF的過表達被認為是這些眼科疾病的主要病因因素。目前的治療手段沒有直接針對這些疾病的發病機制。

發明概述

本發明涉及能夠靶向CTGF?mRNA并干擾CTGF?mRNA表達的干擾RNA。發明的這種干擾RNA可用于治療CTGF相關的眼科疾病如青光眼、黃斑變性、糖尿病性視網膜病變、脈絡膜新血管形成、增殖性玻璃體視網膜病變和異常創傷愈合。

本發明的一個實施方案是提供了減弱受試者眼中結締組織生長因子表達的方法。該方法包括對受試者的眼施用組合物，該組合物包含有效量的干擾RNA如19-49個核苷酸長度的雙鏈(ds)siRNA或單鏈(ss)siRNA和可藥用的載體。

雙鏈siRNA包含有義核苷酸序列、反義核苷酸序列和至少19個核苷酸的至少接近完全連續互補的區域。此外，在生理條件下，反義序列與對應于SEQ?ID?NO：1(人結締組織生長因子DNA的有義鏈序列，Genebank參考號為NM_001901)的mRNA的一部分雜交，并且具有至少19個核苷酸的與對應于SEQ?ID?NO：1的mRNA雜交部分至少接近完全連續互補的區域。施用這種組合物可以減弱受試者眼中結締組織生長因子mRNA的表達。

單鏈siRNA具有19-49個核苷酸的長度，在生理條件下能與對應于SEQ?ID?NO：1的mRNA的起始于379、691、801、901、932、937、969、986、1119、1170、1201、1346、1473、1478、1481、1488、1626、1660或1666位核苷酸的一部分雜交，并且具有能與對應于SEQ?ID?NO：1的mRNA的雜交部分至少接近完全互補的區域。

本發明的實施方案中，雙鏈干擾RNA的反義鏈被設計為靶向對應于SEQ?ID?NO：1的mRNA起始于或包含379、691、801、901、932、937、969、986、1119、1170、1201、1346、1473、1478、1481、1488、1626、1660或1666位核苷酸的核苷酸序列。