[發(fā)明專利]蛋白的生產(chǎn)

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200580046111.5
• 申請日: 2005-11-29
• 公開（公告）號: CN101098886A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發(fā)明（設計）人: 馬里亞·多洛雷斯·路德維德穆西卡;米利亞姆·巴斯蒂達維爾基里;布蘭卡·洛姆帕特羅約;巴勃羅·馬薩阿瓦爾魯納;瑪加麗塔·托倫特克格拉斯
• 申請（專利權）人: ERA生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/425
• 分類號: C07K14/425;C12N15/62
• 代理公司: 北京英賽嘉華知識產(chǎn)權代理有限責任公司
• 代理人: 王達佐;韓克飛

1.在重組蛋白體樣組裝體(RPBLA)中包含重組融合蛋白的非高等植物真核宿主細胞，所述融合蛋白包含連接在一起的兩個序列，其中一個序列為異源于所述宿主細胞的蛋白體誘導序列，另一個序列為感興趣產(chǎn)物的序列。

2.如權利要求1所述的宿主細胞，其中所述RPBLA的密度為約1.1至1.35g/ml。

3.如權利要求1所述的宿主細胞，其中所述融合蛋白還包含所述蛋白體誘導序列和所述感興趣產(chǎn)物的序列之間的接頭序列。

4.如權利要求1所述的宿主細胞，其中所述蛋白體誘導序列包括醇溶谷蛋白或修飾的醇溶谷蛋白。

5.如權利要求4所述的宿主細胞，其中所述蛋白體誘導序列為醇溶谷蛋白序列。

6.如權利要求5所述的宿主細胞，其中所述醇溶谷蛋白序列為γ-玉米蛋白、α-玉米蛋白或稻米醇溶谷蛋白。

7.生產(chǎn)融合蛋白的方法，包括如下步驟：

(a)用包含可操作地同框連接到(ii)第二核酸序列的(i)第一核酸序列的核酸序列轉(zhuǎn)化非高等植物真核宿主細胞，其中所述第一核酸序列編碼蛋白體誘導序列(PBIS)，所述第二核酸序列包含編碼感興趣多肽產(chǎn)物的核酸序列；以及

(b)在適合所述融合蛋白表達和所述表達的融合蛋白組裝進重組蛋白體樣組裝體(RPBLA)的培養(yǎng)條件下維持轉(zhuǎn)化的宿主細胞一段時間。

8.如權利要求7所述的方法，其中所述第一核酸序列(i)的3’端連接到所述第二核酸序列(ii)的5’端。

9.如權利要求7所述的方法，其中所述核酸編碼所述PBIS和感興趣多肽產(chǎn)物之間的接頭序列。

10.如權利要求7所述的方法，其中所述宿主細胞為真菌細胞，尤其是酵母細胞。

11.如權利要求7所述的方法，其中所述宿主細胞為藻類細胞。

12.如權利要求7所述的方法，其中所述宿主細胞為動物細胞，尤其是哺乳動物細胞。

13.如權利要求7所述的方法，還包括回收所述表達的融合蛋白的步驟。

14.如權利要求7所述的方法，其中所述蛋白體誘導序列包括醇溶谷蛋白或修飾的醇溶谷蛋白。

15.如權利要求14所述的方法，其中所述醇溶谷蛋白序列為修飾的醇溶谷蛋白，其包含：

(a)信號肽序列，

(b)γ-玉米蛋白的重復結(jié)構域六肽PPPVHL(SEQ?ID?NO：1)的一個或多個拷貝的序列，以及

(c)γ-玉米蛋白ProX結(jié)構域的全部或部分序列。

16.如權利要求14所述的方法，其中所述醇溶谷蛋白序列為γ-玉米蛋白、α-玉米蛋白或稻米醇溶谷蛋白。

17.如權利要求7所述的方法，其中所述用于轉(zhuǎn)化宿主細胞的核酸序列存在于包含一個或多個調(diào)控序列的表達載體中。

18.如權利要求17所述的方法，其中所述一個或多個調(diào)控序列包含啟動子。

19.包含含有可操作地連接到外源核酸片段的一個或多個調(diào)控序列的載體的重組核酸分子，所述外源核酸片段限定了編碼融合蛋白的基因，所述融合蛋白包含連接到(ii)感興趣多肽產(chǎn)物的(i)蛋白體誘導序列。

20.如權利要求19所述的核酸，其中所述載體的所述一個或多個調(diào)控序列包含適于在適合的真核宿主細胞中啟動所述基因的表達的啟動子。