[發明專利]具有減毒日本腦炎病毒基因作為主鏈的減毒嵌合黃病毒

無效

• 申請號: 200580044240.0
• 申請日: 2005-12-22
• 公開（公告）號: CN101090966A
• 公開（公告）日: 2007-12-19
• 發明（設計）人: 森田公一;鍋島武;三宅信一;大西敏之;福家功;石川豐數;合田英雄;石橋正英;高橋理明
• 申請（專利權）人: 財團法人阪大微生物病研究會
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;A61K39/12;A61K39/295;A61P31/12;C12N7/00;C12N7/04
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 權陸軍;李炳愛

技術領域

本發明涉及具有減毒日本腦炎病毒基因作為主鏈的減毒嵌合黃病毒，其作 為用于預防黃病毒感染的減毒的活疫苗是有用的。

背景技術

目前，已知超過大約60種屬于黃病毒科(Flaviviridae)的病毒(以下簡 稱黃病毒)，包括日本腦炎病毒、西尼羅病毒、登革1-4病毒、黃熱病毒、圣 路易腦炎病毒、蜱傳腦炎病毒、庫寧病毒(Kunjin?virus)、中歐腦炎病毒、賈 薩努爾森林病毒、墨累山谷腦炎病毒、鄂木斯克出血熱病毒、玻瓦散病毒、俄 羅斯春夏季腦炎病毒、Yokose病毒、Apoi病毒和Aroa病毒。

這些黃病毒具有單鏈(+)RNA的基因組，并在基因結構方面互相類似。 黃病毒基因組的可讀框(ORF)由其5′末端開始編碼三個結構蛋白(衣殼(C) 蛋白、前膜(prM)蛋白，其為膜(M)蛋白的前體、和包膜(E)蛋白)和隨 后的七個非結構(NS)蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B和NS5)。

黃病毒的這些結構蛋白和非結構蛋白被翻譯成單個多蛋白；翻譯的多蛋白 然后被蛋白酶和具有宿主細胞和病毒的蛋白酶活性的NS3蛋白加工，從而導致 形成包含上面所述的三種結構蛋白的成熟病毒體。

眾所周知許多上面所述的黃病毒經由昆蟲例如蚊子和蜱來感染哺乳動物， 包括人類和鳥類，并引起腦炎和/或發熱癥狀。起初，這些黃病毒物種的每一種 都固有于特定的區域；因此，限制了感染的地方范圍。但是，近年來，由于交 通/分配的發展、氣候變化等，各種黃病毒感染已經擴展到病原黃病毒的最初生 境以外的地方，從而引起了公共衛生的重要的問題。

在防止病毒感染的擴展中，用疫苗來預防是有效的。然而，盡管如上所述 已經識別了屬于黃病毒科的很多病毒，但是在實際應用中僅僅將用于黃熱病毒 和日本腦炎病毒感染的減毒活疫苗和用于日本腦炎病毒和蜱傳腦炎病毒感染的 滅活疫苗作為用于黃病毒感染的疫苗。尤其是，減毒活疫苗作為廉價的疫苗是 有用的并誘導長期免疫性，但是除了如上所述的那些疫苗以外還沒有批準活疫 苗。

在這些情況下，作為快速開發新的用于各種黃病毒感染的減毒活疫苗的方 法，最近一種應用由基因工程技術制備的嵌合黃病毒的策略已經引起大家的注 意。

例如，ChimeriVax^TM-JE是通過將編碼黃熱病毒疫苗17D毒株的兩個結構 蛋白(prM-E)的基因替換為日本腦炎病毒疫苗SA14-14-2毒株的相應基因來 制備的嵌合黃病毒(參見，例如，國際專利公開號No.98/37911的小冊子和國 際專利公開號No.01/39802的小冊子)。通過存在于與日本腦炎病毒疫苗 SA14-14-2毒株的E蛋白相應的病毒多蛋白中的來自野生型的大量氨基酸突 變，將ChimeriVax^TM-JE減毒到允許其用作疫苗的程度(參見，例如，Arroyo 等人，J.Virol.75:934-942，2001)。

此外，基于這個ChimeriVax^TM-JE的技術，也已經開發了登革1-4病毒的嵌 合黃病毒(ChimeriVax^TM-DEN(1-4))(參見，例如，國際專利公開號No.98/37911 的小冊子和國際專利公開號No.01/39802的小冊子)，以及西尼羅病毒的嵌合 黃病毒(ChimeriVax^TM-WestNile)(參見，例如，國際專利公開號No.2004/045529 的小冊子)，其具有黃熱病毒疫苗17D毒株的基因作為主鏈。

還將這些嵌合黃病毒減毒到允許其用作疫苗的程度，所述減毒主要由存在 于與prM—E蛋白相應的病毒多蛋白中的來自野生型的氨基酸取代所導致。

但是，已經報道了ChimeriVax^TM-DEN1的減毒主要由在用于疫苗生產的細 胞中的該嵌合黃病毒的傳代中發生的E蛋白的氨基酸突變導致(參見，例如， Guirakhoo等人，J.Virol.78：9998-10008，2004)。此外，因為不同血清型的登 革病毒的再感染可能是登革出血熱發作的原因，所以沒有發現該疫苗的實際應 用。